织需求量大，所得信号弱。1994年Kim等[9]报道了以PCR为基础的端粒重复扩增法（telmeric erpeat amplification protocol,TRAP），以端粒酶合成引物作为模板用于扩增，大大改进了以往的测定方法。由于该法简单、敏感性高，有力地推动了端粒酶表达的研究。尽管测定端粒酶活性的扩增方法直接且应用相对容易，但是人们仍很关心各个实验室之间的差异。最近不少学者[10，11]对TRAP法进行了改进，包括设立内对照（internal standard），可以达到半定量或定量测定水平，并可以检测可能存在于某些组织提取物中的扩增抑制剂。此外Gelmini等[12］报道了一种新的改良的快速定量非同位素法，该法使用敏感的DNA的荧光PicoGreen染料，通过测量在端炷酶反应和PCR扩增中产生的双链DNA含量而对端粒酶含量进行定量测定，是测定端粒酶较精确、快速的方法。目前可对大多数病理标本（包括脱落细胞、针吸标本、体腔积液和手术切除标本等）进行端粒酶活性测定，还有学者报道了原位TRAP法，可对细胞内端粒酶活性进行定位测定[13]。 大多数正常体细胞不表达端粒酶活性，但胚系细胞以及小肠的腺腔都能检测到端粒酶活性，正常的白细胞也表达低水平的端粒酶活性，而正常的睾丸和卵巢组织却表达高水平的端粒酶活性，且源于苗勒氏管上皮的宫颈、子宫内膜以及输卵管也能检测到端粒酶活性。另外，半数的肝炎组织以及绝大多数肝硬化组织中也能检测出弱阳性的端粒酶活性[14-16]。Feng等[17]克隆了人类端类酶RNA，发现生殖细胞和肿瘤细胞表达的hTR较正常体细胞和端粒酶阳性组织高得多。端粒酶活性大多数常见的癌症，如前列腺、乳房、结房、结肠、肺和肝等癌症均可测得，其阳性率为85%～95% 。
端粒酶活性测定在肺癌诊断中的应用
肺癌手术标本端粒酶活性测定肺癌手术标本不受取材的限制，能较客观地反映肺癌组织端粒酶的活性情况。Hiyama等[18]用TRAP法测定了136例原发性肺癌的手术切除标本癌组织端粒酶活性，其阳性率80.1%(109/136),而正常邻近组织标本的端粒酶活性阳性率仅为4.4%（3/6
8）。小细胞肺癌端粒酶活性均为阳性（11/11），非小细胞肺癌的端粒酶活性呈高水平见于有肺癌转移破坏者。Albanell等[19]也测定了99例非小细胞肺癌手术标本，其阳性率为85%（84/99），特异性为100%。由此可见，端粒酶测不出或活性很低的非小细胞肺癌可能含有非永生性癌细胞，而高活性的小细胞肺癌可能主要含有永生细胞。由于肺癌标本有很高的端粒酶阳性率和特异性，故测定端粒酶活性可以作为肺癌诊断的标记物。此外，测定切缘肺组织或淋巴结的端粒酶活性可能有助于判断癌组织是否切除彻底。
肺癌支气管冲洗液端粒酶活性测定 肺癌支气管冲洗液是经纤维支气管镜比较容易获得的标本，通常用于细胞学检测，但往往阳性率比较低。Arai等[20]用TRAP法测定了肺癌病人支气管肺泡灌洗液的端粒酶活性，37例中29例（79%）阳性，而细胞学仅24例（67%）阳性。细胞学和端粒酶联合检测其阳性率高达89%，表明支气管肺泡灌洗液端粒酶测定尤其是结合细胞学检测有很好的应用价值。最近Yahata等[21]联合应用以细胞抽提为基础的TRAP法和用于测定细胞内端粒酶活性的原位TRAP法检测支气管冲洗
液标本的端粒酶活性，对肺癌诊断的阳性率为82%（18/22），而用同样的标本进行细胞学检查阳性率仅为41%，两者有显著性差异（P＜0.01）。因此，联合庆用支气管冲洗液标本的端粒酶活性检测与细胞学检查，可大大增加对肺癌诊断的可靠性。 肺癌胸水标本端粒酶活性测定肺癌和结核性胸膜炎均常出现胸腔积液，有时两者的鉴别较困难，有必要寻找更为可靠的诊断方法。Hiyama等[18]用TRAP法测定了3例肺癌病人的胸水端粒酶活性，结果均为阳性，最近Yang等[22]测定了144例胸腔积液病人胸液端粒酶活性，结果显示70例恶性胸水中64例阳性，52例非恶性胸水中仅3例阳性，22例未经证实而疑为恶性胸水的病人中有20例阳性，端粒酶活性测定对恶性胸水诊断的敏感性为91.4%,特异性为94.2%，阳性和阴性预计值分别为0.96、0.89。提示端粒酶活性测定可作为胸腔生活会液有效的诊断和鉴别诊断的辅助方法。
肺癌纤维支气管镜活检标本端粒酶活性测定 经纤维支气管镜活检是肺癌诊断的重要手段，因其创伤小、安全、可靠，被广泛应用于临床。但目前尚未见纤维支气管镜活检标本端粒酶活性测定的报道。根据对端粒酶的认识，推测用纤维支气管镜活检标本本端粒酶活性测定结合其组织学检
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