类风湿关节炎滑膜转化生长因子 1表达及与病理改变的关系

　　【Key words】　Arthritis,rheumatoid;　Transforming growth factor beta;　Synovitis

　　转化生长因子β1(transforming growth factor β1，TGFβ1)是一种重要的调节细胞生长及分化的多肽因子，具有调控血管内皮细胞生长、炎症细胞趋化、成纤维细胞增生以及细胞外基质的合成与降解等作用。类风湿关节炎(RA)的基本病理改变为滑膜炎，表现为滑膜细胞增生、炎症细胞浸润、血管增生以及纤维化改变等。为了探讨RA滑膜上述病变与TGFβ1的关系，我们采用LSAB法检测了26例RA滑膜TGFβ1表达，并与非RA关节炎及正常滑膜对照，结果如下。

　　1　材料与方法

　　1.1　滑膜标本来源及处理：所有滑膜标本均取自中山医科大学第三及第一附属医院骨科住院行关节镜手术及关节置换术的患者，其中RA滑膜26例，诊断符合1987年美国风湿病学会(ARA)修订的诊断标准［1］，男8例，女18例，年龄21～72岁，平均年龄(46±13)岁，病程0.5～26年，平均病程(9±7)年，其中临床活动期23例，缓解期3例(X线Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期各1例)；其他关节炎组的骨关节炎(OA)滑膜14例，男6例，女8例，年龄39～75岁，平均年龄(51±14)岁，病程8个月～20年，平均病程(13±8)年，外伤性关节炎滑膜6例；正常滑膜7例，取自半月板损伤患者。

　　所有滑膜组织离体后立即用10%甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋、连续切片，切片厚度为4 μm，分别作HE染色和TGFβ1免疫组织化学染色。

　　1.2　免疫组织化学染色方法：采用标记的链霉亲合素生物素(LSAB)法［2］，LSAB试剂盒购于DAKO公司(K0681)。一抗为鼠抗人抗TGFβ1单克隆抗体(TB21，购自中国科学院上海细胞所)，二抗为生物素标记的羊抗鼠抗兔免疫球蛋白。检测工作液浓度为1∶600，1 ℃过夜，DAB显色，苏木素复染。以PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3　结果判定及统计指标：TGFβ1阳性细胞为细胞质内出现棕黄或棕褐色颗粒。结果观察阳性细胞的分布与强度，并采用目镜网格测微尺进行半定量计数，即10×10方格中TGFβ1阳性细胞占该种细胞总数的百分数，计算5个视野阳性细胞百分数的平均值。另外采用图像分析系统(物镜20倍)进行TGFβ1染色强度及面积的定量分析［3］。用平均辉度反映阳性强度，总阳性面积及阳性面积百分率反映阳性分布范围。每一切片分别测量3个随机选择的滑膜衬里层和衬里下层视野的平均辉度和总阳性面积(单位：μm2)，取其平均值。由于不同病变滑膜衬里层细胞层数及厚度不同，因此滑膜衬里层仅统计平均辉度。衬里下层统计相同面积(均为全屏面积43 157.37 μm2)下的平均辉度和总阳性面积，并计算阳性面积百分率(总阳性面积/全屏面积×100)。

　　1.4　统计学处理：两组计量资料的均数比较采用t检验，两组等级资料的比较采用非参数检验(Mann-Whitney U检验)，多组计量资料的均数比较采用方差分析，并用Student-Newman-Keuls法进行多个样本均数间的两两比较。若方差不齐，采用t′检验或秩和检验。P＜0.05为差异有显著性。

　　2　结　　　果

　　2.1　滑膜TGFβ1蛋白表达

　　2.1.1　滑膜TGFβ1阳性分布：26例RA滑膜TGFβ1染色均为阳性，阳性主要分布在衬里层细胞和衬里下层浸润的炎症细胞及血管内皮细胞，并且衬里下层细胞外间质处也见阳性染色。衬里层细胞阳性染色在近关节腔侧明显，甚至可见细胞膜染色(见图1)。7例正常滑膜TGFβ1染色阳性主要分布在衬里层，偶见衬里下层血管内皮细胞阳性。其他关节炎组14例OA及6例外伤性关节炎滑膜TGFβ1染色阳性分布与RA类似，但TGFβ1阳性细胞数及染色强度较RA明显减弱(见图2、3)。

　　2.1.2　滑膜衬里层T

上一页  [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页