重组狂犬病毒在原核细胞中的表达

　　2.2　目的基因构建　将分别获得的IL-2和狂犬病毒N蛋白基因分别连接于T载体中克隆，经特异性酶切后，于PBV220表达载体中构建，得到表达载体(PBIRB vetor)，本表达载体有SD序列和PRPL启动子及T1T2终止子，在ECORI和BamHI两酶切位点之间有IL-2 RB基因。

　　2.3　目的基因的表达产物鉴定　目的基因于工程菌中转化后，获得产物经IL-2单抗检测结果见表1。表1结果可见，重组产物具有IL-2活性。表达产物免疫小鼠后，以狂犬病毒标准毒株(CVS)攻击小鼠，小鼠有一定保护力。攻毒途径：脑内0.03 ml，含30个LD50病毒。表1　重组基因表达产物酶联免疫吸附试验结果（略）

　　3　讨论

　　以狂犬病毒及IL-2基因文库设计2对具有特异性酶切位点引物，经PCR扩增后，得到两条特异性基因片段，分别为IL-2(0.4 kD)和狂犬病毒N蛋白(1.4 kD)。两基因于T载体中克隆后，顺利得到重组子。

　　选用PBV220表达载体，正向插入目的基因，获得表达型特异基因载体，该载体除基因自身的启动子和终止子外，还具有PRPL强启动子和T1T2终止子。于工程菌中表达得到较理想效果。

　　普遍认为狂犬病毒只有外膜的糖蛋白能刺激机体产生中和抗体［6］，抵抗病毒攻击，而其它成分不产生中和抗体，抗病毒表现极弱。然而N蛋白细胞免疫调节功能，已被许多专家研究证实［7］。Lutze等用腺病毒表达了狂犬病毒N基因疫苗，免疫小鼠可抵抗病毒攻击［8］。本研究的重组基因产物具有抵抗病毒能力。

　　IL-2是一种重要的细胞因子，它承担着调节机体免疫网络运行功能，采用IL-2作为提高机体免疫反应的信号，与狂犬病毒N蛋白基因重组，辅佐狂犬病毒N蛋白的抗原性，提高免疫效果。以IL-2作为内源性佐剂提高
重组抗原的免疫原性值得深入探讨。

　　4　参考文献

　　　Otvos L J,KrivulKa G R，Urge L et al. Comparison of the effects of amino acid substitutions and beta-N-VS.alpha-o-glycosylation on the T cell stimulatory activity and conformation of an epitope on the rabies virus glycoprotein.Biochim Biophys Acta,1995;29(1):55

　　 Lodmell D L，Smith J S，Esposito J J et al.Cross-protection of nice against a global spectrum of rabies virus. J Virol,1996;69(8):4957

　　 Xiang Z Q，Spitalnik S L，Cheng J et al.Immune responses to nucleic acid vaccine to rabies 　virus.Virology,1995;209(2):569

　　 　Sambrook J,Fritsch E F,Maniatis T ed.金冬雁，黎孟枫译.分子克隆实验指南.第2版.北京：科学出版社，1996：674-676

　　 　李　蓉.克隆识别.北京：北京医科大学中国协和医科大学出版社，1994：177-182

　　　Ray N B，Ewall L C，Lodemll D L.Nanogram quantities of plasmicl DNA encoding the rabies virus glycoprotein protect mice against lethal rabies virus infection.Vacce,1997;15(8):892

　　[7] Goto H,Minamoto N,Ito H et al. Expression of the nucleoprotein of rabies virus in Escherichia Coli and mapping of antigenic sites.Arch Virol,1995;140(6):1061

　　[8] Lutze W C,Sapp T,Sidhu W et al.In Vitero assessments of the geneti

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