重组狂犬病毒在原核细胞中的表达

　　摘　要　目的：探讨狂犬病毒N蛋白的免疫原性。方法：采用生物工程技术、基因重组方法。结果：以狂犬病毒基因文库及IL-2基因文库设计两对引物，基因扩增后分别得到完整狂犬病毒N蛋白基因片段(1.4 kb)和IL-2基因片段(0.4 kb)，两基因片段经重组后，构建了狂犬病毒N蛋白及IL-2重组基因工程菌。重组基因产物具有特异性生物活性。用IL-2单抗检测有一定IL-2活性。免疫小鼠后，小鼠可抵抗狂犬病毒脑内攻击。结论：采用的载体及方法、路线可行，重组产物具有生物活性。

　　Expression of recombinant rabies virus in Escherichia Coli

　　REN Zheng-Hua,FANG Lian-Jie,LIU Bao-Quan① et al.

　　Third Clinical Hospital of Bethune Medical University,Changchun 130031.①Northeast Agricultural University,Harbin150021

　　Abstract Objective:Study immunogenicity of rabies virus nucleoprotein.Methods:Molecular biology and gene recombination.Results:Had designed two pairs of inductive substance based on gene library of rabies virus and IL-2.After amplification,obtained a gene section of IL-2 of 0.4 kb and one of rabies nucleoprotein of 1.4 kb.With recombination of the two sections,obtained nucleoprotein of rabies virus and IL-2 recombinant.The substance obtained is bio-active and possess certain IL-2 activity.It could induce resistance to rabies virus challenge to the head of the mice.Conclusion:Obtained to activity material from the test.

　　Key words Rabies virus nucleoprotein Rabies virus recombinant IL-2

　　狂犬病毒核蛋白(NP)，长期以来一直被认为是结构蛋白，是病毒遗传的主要成分，不具有抗原性［1］。近年来许多专家相继报道核蛋白的免疫保护作用［2］。核蛋白主要作用表现在刺激机体免疫活性细胞增殖，促进细胞免疫，参与免疫调节［3］。但核蛋白只能刺激细胞免疫，不产生中和抗体，核蛋白的免疫原性并不十分理想。为提高核蛋白的免疫原性及生物学效应，本研究通过基因重组方法引入IL-2基因，从而提高核蛋白的免疫原性，达到预防、治疗狂犬病的目的。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　狂犬病毒株CVS由中国药品生物制品检定所提供。

　　1.1.2　白细胞介素-2质粒含IL-2全基因片段由美国Feris实验室赠送。

　　1.1.3　实验中所用的内切酶、连接酶、T载体等均购自Promege公司，其他试剂购于华美生物工程公司。

　　1.2　方法

　　1.2.1　目的基因克隆及重组　以狂犬病毒全基因及IL-2全基因文库设计特异性引物，以狂犬病毒cDNA和IL-2 cDNA为模板，经PCR扩增，调出目的基因，于T载体中克隆，获得足够量基因片段［4］。

　　1.2.2　重组基因的构建与表达　将两目的基因经修饰连接后，重组于PBV220表达载体中并转化于DH5α受体菌中，得到工程菌。

　　1.2.3　SDS-PAGE、4.5%浓缩胶、15%分离胶　参见文献［5］。

　　1.2.4　表达产物生物学鉴定采用ELISA检测IL-2活性　采用小鼠免疫法检测表达产物的抗原性。

　　2　结果

　　2.1　目的基因PCR引物设计与扩增　设计两对PCR特异性引物，含有酶切位点及启动子的IL-2引物。含有酶切位点及终止子的狂犬病毒N蛋白基因

[1] [2] [3] 下一页