类风湿性关节炎患者血清抗Sa抗体检测及临床意义

王昶 王建东 曾常茜  中华中西医杂志

　　基金项目:吉林省卫生厅科学基金资助项目（编号:96037）

　　【摘要】 目的 检测类风湿性关节炎（RA）患者血清抗Sa抗体，并证明抗Sa抗体对RA的诊断意义。方法 采用Western-blot方法。结果 抗Sa抗体诊断RA的敏感度为42.7%，特异度为100%，阳性确诊率为100%，阴性确诊率为71.1%。结论 血清抗Sa抗体对RA诊断的特异度和阳性确诊率均高于类风湿因子（RF），因此具有临床实用价值。

　　关键词 类风湿性关节炎抗Sa抗体 Western-blot方法 类风湿因子

　　Detection and clinical significances of anti-Sa antibody in RA serum

　　Wang Chang，Wang Jiandong，Zeng Changqian

　　Central Hospital of Jilin City，Jilin132011.

　　【Abstract】 Objective To detect anti-Sa antibody in rheumatoid arthritis（RA）serum and prove the signifiˉcances of seral anti-Sa antibody in diagnostic RA.Methods Western-blot method was used.Results The sensiˉtivity，specificity，PPV and NPVwere42.7%，100%，100%and71.1%respectively.Conclusion Diagnostic speciˉficity and PPV of seral anti-Sa antibody to RA patients were better than those of rheumatoid factor（RF）and it was practical clinically.

　　Key words RA anti-Sa antibody western-blot method RF

　　类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是最常见的自身免疫病，发病率1%～2% ［1～3］ 。RA患者血清中可以检测到多种自身抗体，如RF、AKA、APF、RA33抗体、HaT-1抗体等，这些抗体在RA患者血清的阳性率为5%～75%，但均缺乏特异性 ［4～9］ 。抗Sa抗体是新近发现的RA患者自身抗体 ［10］ 。我们从人胎盘中提取Sa抗原，建立了血清抗Sa抗体的Western-blot检测方法，并研究了血清抗Sa抗体对RA患者的诊断意义。现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 胎盘取自北京协和医院妇产科，产妇身体均健康，无自身免疫病和传染病。RA、MCTD、SLE、SS和PSS患者血清由北京协和医院和北京友谊医院提供，符合RA诊断标准。健康人血清由吉林市中心血站提供。酶标抗体购自华美生物工程公司。低分子量蛋白（marker）购自上海生化试剂公司。DE52和DAB购自Sigma化学公司。NC膜购自浙江黄岩四青生化材料厂。考马斯亮蓝、bis和tris等试剂均为分析纯。

　　1.2 仪器 HD25-A核酸-蛋白监测仪由宁波市医用仪器厂生产。DYY-Ⅲ电泳槽和DYY-Ⅲ电泳仪由北京六一仪器厂生产。DYY-Ⅲ垂直板电泳仪由北京东方仪器厂生产。隔水式电热培养箱由上海跃进医疗仪器厂生产。200/2.0转印电泳仪为Bio-Rad生产。超速冷冻离心机J2-21为Beckman公司生产。

　　1.3 Western-blot方法检测血清抗Sa抗体 ［11］ 取脾制成匀浆，4℃15000r/min离心45min，收集上清。过DE52柱，洗脱，分别收集各组洗脱液。透析浓缩。SDS-PAGE分离。浓缩胶层电压100V，分离胶层电压150V。电泳完毕后，一部分胶用考马斯亮蓝染色，脱色液脱色，照相。另一部分胶经常规电转印转NC膜，4℃下截面电流120mA，12h。转印后，NC膜用15%小牛血清中37℃封闭2h。洗涤5次。然后与1:40稀释的待检血清37℃孵育2h，洗涤5次。再与1:800稀释的酶标抗体37℃孵育2h，洗5次。在DAB底物液中显色15min，蒸馏水漂洗。

　　1.4 重复性试验 取三份抗Sa抗体阳性的RA血清同日内分别重复6次检测其抗Sa抗体的滴度。取3份抗Sa抗体阳性的RA血清，分

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