致敏大鼠肺组织白细胞介素10 mRNA表达及一氧化氮对其的影响

　　材料与方法　(1) 动物模型建立及分组：雄性SD大鼠20只，随机分为4组：A组(6只)为正常对照组；B组(6只)为阳性对照组，给予卵蛋白(OVA)致敏和刺激，但不用硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)或左旋精氨酸(L-arg)腹腔注射，以生理盐水代之；L-arg组(C组)、L-NAME(D组)各4只，每天于OVA雾化吸入前分别给予300 mg/kg的L-arg和30 mg/kg的L-NAME腹腔注射。B、C、D组大鼠的致敏及刺激参照文献方法进行，雾化后第7 d留取肺组织。(2) 逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠肺组织IL-10 mRNA表达：从肺组织匀浆中提总RNA并定量，进行RT-PCR。IL-10引物浓度为50 pmol/ml，542 bp，5′引物：GAAAACAGAGCTTVAG CATGCTTGG 3′，引物：TTTGAGTGTCACGTAGGCTTCTATGC，5%琼脂糖电泳鉴定PCR引物。然后将PCR电泳图像扫入图像分析仪，分别分析目的电泳带的积分光密度值，再将该值进行统计分析，由于各组RNA启始量相同，因此目的带积分光密度值越大，说明目的基因的表达量越大。(3) 普通病理观察：随机观察5个视野，用显微镜特定标尺分别测定(40×10)单位面积支气管粘膜及粘膜下嗜酸细胞(EOS)、淋巴细胞数。(4) 肺组织匀浆中NO代谢产物(NO^-₂)测定：取肺组织冰浴下制作匀浆，留取上清，根据NO检测试剂盒说明进行操作。

　　统计学处理：各组结果以±s表示，各组间数据采用F检验，显著性检验采用q检验。

　　结果　(1) RT-PCR结果见表1，图1。阳性对照组大鼠肺组织IL-10 mRNA表达量明显弱于正常对照组，L-arg组IL-10 mRNA的表达量弱于阳性对照组(P＜0.05)，L-NAME组IL-10 mRNA表达量则明显强于阳性对照组(P＜0.01)。(2) 各组大鼠气道炎性细胞的变化：每平方毫米支气管粘膜下，阳性对照组大鼠气道EOS为(22.7±4.9)个、淋巴细胞为(34±5.0)个，明显多于正常对照组(0、0.21±0.12)个(P＜0.01)，L-arg组气道EOS为(28.7±1.8)个，多于阳性对照组(P＜0.05)；淋巴细胞也有增多趋势，但两组间差异无显著性(P＞0.05)。L-NAME组气道EOS为(13.3±3.3)个，少于阳性对照组(P＜0.05)，淋巴细胞减少，但差异无显著性(P＞0.05)。(3) 肺组织匀浆中NO代谢产物：NO代谢产物NO^-₂值在正常组、阳性对照组、L-NAME组、L-arg组分别为(0.32±0.18)μmol/L、(1.22±0.32)μmol/L、(0.68±0.15)μmol/L、(1.56±0.27)μmol/L，L-arg组NO^-₂含量高于阳性对照组(P＜0.05)，L-NAME组NO^-₂含量低于阳性对照组(P＜0.01)。(4) 3个致敏组大鼠气道粘膜下EOS及淋巴细胞数目的变化与其IL-10 mRNA表达的积分光密度值呈明显的负相关(r=-0.673，P＜0.01)，各组大鼠肺组织NO^-₂含量的变化与其IL-10 mRNA表达的积分光密度值也呈明显的负相关关系(r=-0.773，P＜0.05)。

表1　哮喘大鼠模型肺组织IL-10 mRNA表达变化(±s)

　　注：方差分析q检验，与正常组比较^* P＜0.01；与阳性对照组比较^△ P＜0.01；与阳性对照组比较^▲P＜0.05

图1　致敏大

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