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131碘 |
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Radionuclide imaging
(Natl Med J China, 1998, 78：537-539)
目前，原发性肝细胞癌(简称肝癌)主要治疗手段仍是手术切除。但是，当病人确诊为肝癌时，多已失去手术切除的机会，因此，肝癌的诊断，特别是定性诊断和早期诊断，至为重要。近几年，我们在肝癌免疫导向研究中发现肝癌单克隆抗体片段放射免疫显像(RII)具有定位诊断，定性诊断和及时诊断的良好效果，现报道如下。
材料和方法
一、肝癌单克隆抗体HAb18 Fab的制备及纯化
HAb18及无关抗体3D8(抗出血热病毒单克隆抗体)经木瓜蛋白酶消化，透析，上快速蛋白质液相层析(FPLC)二乙氨乙基(DEAE)-40HR层析柱纯化，收集第一洗脱峰，经浓缩、过滤、除菌及分装，于-20℃保存备用。
二、HAb18 Fab免疫活性测定
以肝癌HHCC活细胞，应用流式细胞术测定HAb18 Fab活性，以3D8 Fab为对照［1］。
三、131Ⅰ标记HAb18 Fab及蛋白标记率测定
采用高效碘标记法进行核素标记［2］，按下述公式计算蛋白标记率：
四、标记物的质控
1.免疫活性测定：制备HHCC细胞每管5×106/0.1ml，将50 μl稀释后的131Ⅰ-HAb18 Fab加入HHCC悬液，孵育，离心，分别测细胞和上清液中放射性计数，按下述公式计算免疫结合率：
2.热原测定：取家兔3只，按文献［3］方法测定热原。
3.无菌试验：按文献［3］方法试验。
4.急性毒性试验：昆明鼠5只，尾静脉给药，每鼠14.8 MBq/0.4 ml。给对照组鼠注射生理盐水0.4 ml/只。
五、放射免疫显像
1.荷人肝癌裸鼠：实验前72小时饮用0.25%的NaI水，封闭甲状腺。实验具体步骤如下：(1) 实验分组及给药方法：将裸鼠分为A、B、C及D组，每组分别为10、3、3及2只裸鼠，A、B及C组均在尾静脉分别注射3 700kBq的131Ⅰ-HAb18Fab、131Ⅰ-HAb18及131Ⅰ-3D8 Fab，D组为空白对照。(2) 131 Ⅰ-HAb18 Fab生物学分布及其显像：在注入偶合物后4、8、12、24、36及48小时分别进行ECT扫描。后处死鼠，取肿瘤，全血及主要组织器官，称重，测放射性cpm，计算瘤(T)/非瘤(NT)比值及每克组织占注射剂量的百分数。
2.肝癌病人：(1) 一般情况：临床诊断为肝癌者，共6例，均为肝癌Ⅱ期。(2) 偶合物及其质控：各项指标同前述。(3) 给药途径与方法：给药前3天起，口服卢戈碘液，3次/日，以封闭甲状腺。首先，静脉滴入地塞米松5 mg，30分钟后缓慢注入
131Ⅰ-HAb18 Fab，111～166.5MBq/1.8～2.0 ml。(4) 显像：采用GE staream 3000 SPECT，在进行碘扫描前15分钟，每人注入99mTc-植酸钠18500KBq。于5分钟、1、4、12、24、48及72小时根据肿瘤所在部位，行前位、后位、侧位及全身扫描。
结 果
一、HAb18 Fab的纯化与鉴定
HAb18 Fab纯化见图1。SDS-PAGE鉴定纯度达95%。
二、HAb18 Fab免疫活性
图1 HAb18 Fab DEAE-40HR FPLC纯化色谱图
经流式细胞仪检测，HAb18 Fab血在荧光波长范围内有荧光染色细胞的吸收峰，而3D8 Fab组则无荧光染色细胞的吸收峰，显示HAb18Fab较好的保持了抗体的免疫活性。
三、蛋白标记率
131 Ⅰ标记蛋白峰各管实测放射性总计数19 665 cpm，投用131Ⅰ总计数为21 865 cpm，蛋白结合率为90.40%。
四、131Ⅰ－HAb18 Fab免疫结合率
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