|
应用图象处理系统对深低温停循环后神经细胞中钙颗粒定量分析 |
| |
定量分析，试图探索钙内流在超微结构改变中的重要作用，寻求一种DHCA
120分钟下脑保护的有效方法。
材 料 和 方 法
一、DHCA脑损伤动物模型的建立
用闭胸式体外循环（CPB）方法建立犬DHCA模型，动物经血流降温至鼓膜温18℃后，停止
全身循环2小时.，期间以冰袋覆盖头部维持脑温，用α方式管理血气。停循环结束后复温至37℃，
继续观察8小时后处死动物。
9只成年犬随机分成三组，正常组（n=1）、对照组（n=4）进行单纯18℃DHCA 2小时，术
中不用药物，脑保护组（n=4）于DHCA结束时经颈静脉向头部注射FDP 375 mg/kg（Sigma公司
产品）。其中对照组又分为DHCA结束、再灌60分钟和术后8小时三个小组。保护组分为再灌60
分钟和术后8小时二个小组。取右侧额顶叶皮质观察。
二、Ca2+电镜组化显示技术〔2,3〕
迅速取样后，将样品放在预冷的蜡板上并在组织表面滴预冷的3%戊二醛-90 mmol/L草酸钾
溶液，切小组织后置于上液中进行0～4℃固定2小时，随后用7.5%蔗糖-90 mmol/L草酸钾溶液振
荡浸洗，继之以1%锇酸-2%焦锑酸钾做后固定，然后进行酒精梯度脱水，环氧树脂812浸透过
液，平板包埋、超薄切片后经醋酸铀与柠檬酸铅电子双重染色，日立H-600透射电镜观察、拍
照。
三、对细胞内钙颗粒进行定量分析〔4,5〕
细胞内钙颗粒的数密度（NV）为单位体积（1μm3）内该颗粒的数量，可按公式Nv=NA·D
计算〔6〕。NA为颗粒的面数密度，即单位截面积（A）中钙颗粒数（n），NA＝(n)/(A)，D为颗粒
的平均直径。式中n, A及同一截面内各颗粒的直径d1, d2, …, dn都可用图象分析仪测得。体密度
VV为单位体积细胞质内的颗粒体积VV=(n)/(i=1Axi)/(n)/(i=1Ari)（Axi为第i张照片上钙颗粒的截
面面积，Ari为第i张照片上参照系的截面面积）。
二维图象上的面积通过图象处理仪很容易测得。收集资料时，在H-600透射电镜下观察，
放大倍数6 000倍左右。动物共分三组：正常组、对照组和保护组。其中对照组又分为DHCA结
束、再灌60分钟和术后8小时，保护组分为再灌60分钟和术后8小时.。每组约拍6张照片，共获
40张左右。电镜照片通过摄像机输入显示屏。我们通过Ca2+细胞化学技术能使细胞内Ca2+原位
沉淀，在电镜下可见到高电子密度的Ca2+颗粒，图象处理仪很容易分辨。通过二值图分割，留
下感兴趣的钙离子颗粒，由德国产IBAS图象处理系统进行分析计算，从而获得颗粒直径、颗粒
平均面积、颗粒的最大径和最小径等参数。再通过计算求得数密度和体密度，结果见表1，并
用t检验求出各组t值，得出各组间的参数差异程度。
结 果
一、细胞的超微结构改变
在透射电镜下可见正常组神经细胞内钙颗粒分布较少, 细胞器结构正常。见图1。对照组
在经DHCA 2小时后，神经细胞破坏明显，线粒体肿胀，嵴断裂，胞质与线粒体内均可见到较
多黑色圆形钙颗粒，大小不等、分布不均，呈单个沉着，见图2。DHCA 2小时再灌注60分钟，
致密颗粒呈簇状聚积于线粒体，粗面内质网与高尔基复合体中，细胞器破坏明显，见图3。特
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 共焦镜同时检测细胞内Ca2 和pH的变化
下一个医学论文： 不同剂量微波热凝后面神经变化的观察
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 临床医学论文 >> 正文