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体内体外联合免疫法制备抗鼻咽癌单克隆抗体 |
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李官成 朱建高 周国华 孙去病
摘要 目的 获得高特异性的抗鼻咽癌单克隆抗体。方法 以湖南鼻咽癌细胞株HNE2细胞作免疫原，经体内体外联合免疫方法获得免疫脾细胞，并与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得抗鼻咽癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系，用ELISA、免疫组化筛选阳性克隆。结果 获得10株稳定分泌抗鼻咽癌单克隆抗体的杂交瘤，其中HNL1和HNL5用免疫组化检测对鼻咽癌组织反应的阳性率分别为60.0%和65.0%。结论 抗鼻咽癌单克隆抗体HNL1，HNL5对鼻咽癌有较好的选择性。
关键词 鼻咽肿瘤；癌；抗体，克隆；抗体，肿瘤
Preparation of Monoclonal Antibodies Against Nasopharyngeal Cancer by in vivo and vitro Combining Immunization
LI Guancheng，ZHU Jiangao，ZHOU Guohua，SUN Qubing
Cancer Research Institute,Hunan Medical University，Changsha，410078
Abstract Objective To achieve highly specific monoclonal antibody against Nasopharyngeal Cancer (NPC).Methods Using Hunan NPC cell lines (HNE2) as immunogen, hybridoma cell lines were obtained through fusion of SP2/0 myeloma cells with immunized murine spleen cells by in vivo and vitro combining immunization. The positive clones were screened by an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunohistochemical method.Results Ten hybridoma cell lines secreting stable anti-NPC monoclonal antibody were generated.As shown by indirect immunohistochemical detection, the percentages of positive reaction to NPC tissue samples were 60.0% for HNL1 and 65.0% for HNL5 respectively.Conclusion Anti-NPC monoclonal antibody HNL1 and HNL5 exhibit fairly good specificity for NPC.
Key words nasopharyngeal neoplasms;antibodies,monoclonal;antibodies,neoplasm
鼻咽癌是我国南方和东南亚国家常见的恶性肿瘤之一，目前对鼻咽癌单克隆抗体的研究，国外尚未见有报道。国内崔运昌等［1］用鼻咽癌细胞株CNE2为抗原，获得三株抗鼻咽癌单克隆抗体；孙去病等［2］用另一细胞株CNE1作免疫原， 也获得12株杂交瘤细胞系。笔者用湖南鼻咽癌细胞株HNE2为免疫原，经体内体外联合免疫的方法用B淋巴细胞杂交瘤技术，建立新的能分泌抗鼻咽癌抗体的杂交瘤细胞系， 以期获得有较好特异性的抗鼻咽癌单克隆抗体。
1 材料与方法
1.1 免疫原及免疫方案 以HNE2细胞株及HNE2细胞中提取的粗抗原为免疫原［3］。采用体内和体外联合免疫方法，即按常规给Balb/C小鼠腹腔注射107 HNE2细胞，共3次，每次间隔两周，第3次注射2周后拉颈处死小鼠，无菌取出脾脏，制成单细胞悬液，并用20 ml含20％小牛血清的DMEM混悬细胞，加入rHu IL-2，rHu IL-6，PWM和无菌HNE2粗抗原，使其终浓度分别为200 u/ml，500 u/ml，1:200和10 μg/ml，置5% CO2 孵育箱中37 ℃培养5 d后，收获细胞，苔盼蓝着色计数。
1.2 细胞融合［4］ 将上述免疫脾细胞与SP2/0[1] [2] 下一页
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