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应用新技术对急性髓系白血病骨髓基质细胞粘附分子ICAM |
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酶底物显色液20μl后37℃下孵育显色20分钟，蒸馏水洗后，Mayer苏木素复染胞核后4分钟水洗，甘油明胶封片后镜检，以C5型目镜测微网计数mm2中阳性细胞数。
1.2.5 标准判定：阳性细胞数与对照组平均值相比多20%以上为阳性标准，所有病例均接受标准诱导化疗2个疗程后评价疗效。
1.2.6 统计方法：χ2检验和t检验。
2 结 果
2.1 不同骨髓活检塑料包埋对检测骨髓基质细胞ICAM-1表达的影响 8例采用Hemapun948包埋的白血病骨髓切片中7例ICAM-1检测为阴性，仅1例有个别阳性细胞；而这8例患者Hemapun959包埋切片中均可检测到明显阳性细胞，其余20例Hemapun959包埋切片中有15例检测到ICAM-1阳性细胞。
2.2 ICAM-1在骨髓活检切片上的表达 ICAM-1主要表达于血管内皮细胞和纤维母细胞，在骨髓细胞外基质中也有表达。ICAM-1在AML患者骨髓活检切片上表达有很大差异，为0～324个/mm2，平均84.61个/mm2，28例AML患者中ICAM-1阳性15例。
2.3 ICAM-1表达与急性髓系白血病FAB亚型间的关系 粘附分子ICAM-1在AML各亚型中均有一定程度的表达，ICAM-1在AML各亚型间的表达无显著差异，其中在M3亚型、慢粒急粒变表达偏高(见表1)。
2.4 AML患者临床疗效与ICAM-1表达关系(见表2)。
表1 FAB各亚型ICAM-1表达情况
FAB亚型 例数 阳性例数 表达率(个/mm2)
M1 3
1 78.00
M2 9 3 56.22
M3 4 3 134.50
M4 6 3 96.00
M5 2 1 63.50
M6 1 1 76.00
CML-BC 3 3 104.00
对照组 10 3 62.80
表2 AML患者临床疗效与化疗前ICAM-1表达关系
疗 效 例
数 ICAM-1表达
阳性例数 阳性细胞数(个/mm2)
完全缓解(CR) 13
4
53.38
部分缓解(PR) 4 1 43.25
未缓解(NR) 11 8* 136.55**
注：*与CR组比较χ2＝4.20，P＜0.05；**与CR组比较t＝2.61，P＜0.02。
3 讨 论
粘附分子广泛分布于造血和非造血细胞，是调节正常造血前体细胞与骨髓微环境基质细胞/细胞外基质粘附层的粘附并影响造血前体细胞增殖、分化的关键因素之一［3］。在急性白血病中，粘附特性增强可能是白血病细胞异常增殖及残留白血病细胞重新获得增殖优势的原因［4］。但目前关于骨髓基质细胞/细胞外基质在粘附过程中作用的研究较少，这主要是由于在骨髓涂片中无法获取骨髓基质；而石蜡包埋的骨髓活检标本在脱钙中经强酸的处理破坏了骨髓基质及细胞抗原性；常规塑料包埋在聚合中产生高热且包埋单体与切片中细胞蛋白质氨基末端结合，从而遮蔽了切片中细胞的酶组化、免疫组化反应性。本研究中运用骨髓活检塑料包埋新技术(主要为Hemapun959包埋)，即冷丙酮固定、脱水，低温下聚合避免聚合中的高热，在包埋剂中加入甲基苯甲酸盐，其原理为甲基苯甲酸能有效地抑制包埋单体与切片中细胞蛋白质氨基末端结合，从而能成功地进行骨髓活检标本中基质细胞的抗原检测，由此而大大提高了骨髓活检在恶性血液病研究中的价值［5］。本实验中采用这一方法成功地进行了骨髓基质细胞粘附分子的检测，再一次证明了这一包埋技术的优越性，值得注意的是Hemapun948包埋在本实验中未能成功检测骨髓基质细胞抗原表达，这可能是因为Hemapun948包埋要求的条件比较严格，包埋中使用的Bouin液可能对基质细胞的抗原性有破坏。
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