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应用新技术对急性髓系白血病骨髓基质细胞粘附分子ICAM |
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金朝晖 陶英 杨梅如 刘薏芝 浦权
【摘 要】 目的：探讨骨髓活检塑料包埋技术在研究AML骨髓基质细胞粘附分子ICAM-1表达中的应用价值。方法：8例AML患者骨髓活检标本同时应用Hemapun948/Hemapun959包埋，其余20例标本均采用Hemapun959包埋，然后用APAAP法行粘附分子ICAM-1的检测。结果：采用Hemapun959包埋技术可成功地进行骨髓基质细胞ICAM-1的检测，急性髓系白血病FAB各亚型间ICAM-1的表达无明显差异，AML未缓解组ICAM-1表达高于缓解组(P＜0.02)。结论：骨髓活检塑料包埋新技术可广泛应用于骨髓基质细胞的研究；粘附分子ICAM-1在急性髓系白血病患者骨髓细胞中的表达有很大差异，ICAM-1高表达的患者有化疗抵抗特征，可作为预后不良的指标之一。
【关键词】 骨髓活检 塑料包埋 白血病 髓系急性 基质细胞 粘附分子
骨髓基质细胞作为骨髓的一个重要组成部分，在血液病的发病、转归和预后等方面有着极为重要的作用。近年来，随着造血干细胞移植术的广泛开展，骨髓基质细胞正赢得人们越来越多的重视，但目前大多数研究仍停留在细胞培养的阶段，对血液病患者骨髓基质细胞的研究甚少。我们报道应用骨髓活检塑料包埋新技术可有效地对骨髓基质细胞粘附分子ICAM-1表达进行检测，该方法可广泛应用于骨髓基质细胞的研究。
1 材料与方法
1.1 病例选择
1.1.1 观察组：急性髓系白血病28例，男16例，女12例，年龄22～81岁，中位年龄59岁。根据FAB协作组诊断标准(1985)和免疫分型确诊，所有病例均系初治病例，其中M1型3例，M2型9例，M3型4例，M4型6例，M5型2例，M6型1例，慢粒急粒变3例。
1.1.2 正常对照组：增生性贫血患者10例，男6例，女4例，年龄18～56岁，中位年龄42岁。
1.2 实验方法
1.2.1 取材处理：以B6501型骨髓活检针于受检者髂后上棘局麻后作一步法双标本取材。8例患者骨髓活检标本同时采用本实验室自行配置的二种骨髓活检塑料包埋剂（Hemapun948/Hemapun959）进行包埋。其余20例患者仅用Hemapun959包埋。
1.2.2 Hemapun948包埋［1］：第一,包埋液配制。甲液：甲基丙烯酸二羟基乙基酯单体(HEMA)100ml，2-丁氧乙醇15ml，过氧化苯甲酰1.0g，充分摇匀，待过氧化苯甲酰完全溶解后置棕色瓶中4℃保存；乙液：聚乙二醇(PEG 400) 10ml，N-N二甲基苯甲胺1ml，混匀，4℃保存备用。全包埋液配制：甲液42份∶乙液1份按比例混合；第二,操作步骤。①固定：骨髓活检标本放入4℃Bouin液中置冰箱内，时时摇动固定1小时；②漂洗：固定的骨髓标本用4℃缓冲液漂洗30分钟（缓冲液配制：0.1M二甲肿酸钠缓冲液加3%蔗糖，pH7.4）；③脱水：在冷甲醇中梯度脱水，60％甲醇→80％甲醇→95％甲醇→无水甲醇(二次)，每次10分钟；④浸渍：活检块移置于盛有甲液的模具底部，置4℃真空装置下浸渍2小时后，再更换甲液置4℃真空装置下浸渍24小时；⑤聚合：经以上浸渍后带活检块模具按42∶1比例加入乙液成全包埋液，再放入4℃冰箱真空下聚合过夜；⑥切片裱片与贴片：包埋块经修整后切割成3～4μm厚切片，于事先滴加数滴浓氢氧化氨液的冷水浴中裱片贴片。
1.2.3 Hemapun959包埋［2］：第一,骨髓活检塑料包埋液配制。甲液：甲基丙烯酸二羟基乙基酯单体(HEMA)40ml，过氧化苯甲酰0.09g，N-N二甲基苯甲胺20ml充分摇匀，全溶后置棕色玻璃瓶内4℃保存备用；乙液：聚乙二醇(PEG 400)10ml，N-N二甲基苯甲胺1ml，混匀，4℃保存备用。全包埋液配制：甲液42份∶乙液1份按比例混合。第二,操作步骤。①固定脱水：骨髓活检标本放入4℃丙酮中置冰箱内，时时摇动固定脱水2小时；②浸渍：活检块移置于盛有甲液的模具底部，置4℃下浸渍2～4小时；③聚合：经以上浸渍后带活检块模具按42∶1比例加入乙液成全包埋液，再放入4℃冰箱聚合过夜；④.切片裱片与贴片：包埋块经修整后切割成3～4μm厚切片，于事先滴加数滴浓氢氧化氨液的冷水浴中裱片贴片。
1.2.4 切片免疫组化染色：碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)法。一抗ICAM-1鼠抗人单抗购自DAKO公司，二抗为碱性磷酸酶结合兔抗鼠IgG，三抗为APAAP酶标复合物，三者均于湿盒内室温下孵育30分钟，滴加碱性磷酸[1] [2] 下一页
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