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痰液P53基因检测对肺癌的诊断价值 |
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王和英 张晓博 郭丽萍 靳洪涛
近年来大量的研究证明，野生型 P53基因是广泛存在于人组织细胞中的抑癌基因，P53基因突变与缺失是肺癌发生的重要原因之一［1］。但以往研究大多为固定肺癌标本分析，本研究通过对可疑肺癌患者同步送检痰液细胞学及P53基因分析，初步显示，同步进行痰病理学与P53检测有助于提高肺癌诊断率。
1 资料与方法
1.1 病例选择 根据病史与影像学对1997年7月至1999年6月可疑58例肺癌患者，连续3天送痰液细胞学及P53基因分析。同时进行纤支镜活检，必要时行肺泡灌洗，收集肺泡灌洗液（BLAF），周围型病变同时行经纤支镜肺活检(TBLB),对胸腔积液者行胸水细胞学检查。
1.2 检测方法 痰液先用盐水洗涤，加入粘蛋白溶酶，离心取细胞沉渣。①DNA提取；②P53基因5～8外显子目标片段的扩增等按有关操作程序执行。
2 结 果
2.1 病理分型 可疑肺癌58例，经病理学证实为肺癌者40例；其余18例中支气管内膜结核3例，非特异性炎症15例，该18例患者作为阴性对照组。40例肺癌确诊方式及病理分型见表1。
表1 40例肺癌确诊方式及病理分型(阳性例数)
鳞癌 腺癌 小细胞癌 大细胞癌 肺泡癌 总阳性例数(%)
痰涂片 11
1 6 0 0 18(45.0)
刷检 15 3 5 0 0 23(57.5)
活检 16 4 6 1 0 26(65.0)
肺泡灌洗液 10 4 6 0 1 20(50.0)
胸水细胞 4 6 4 0 0 14(35.0)
总 计 18 11 9 1 1 40
2.2 痰液细胞沉渣P53检测结果 40例肺癌中，送检痰液38例(2例无痰)，痰涂片病理阳性率47.4% (18/38)，主要为中央型鳞癌和小细胞肺癌。痰液细胞沉渣P53基因突变阳性率为73.7%（28/38），阴性对照组P53基因突变假阳性率为11.1%（2/18）,见表2。
表2 38例痰液细胞沉渣P53 5～8外显子点突变
鳞癌 腺癌 小细胞癌 对照组
单个突变 3
3
3
1
多个突变 4 1 2 1
部分缺失 5 3 4 0
阳性率(%) 66.7(12/18) 63.6(7/11) 100(9/9) 11.1(2/18)
本组38份痰液中有10份痰病理阴性，但沉渣却发现有P53基因改变，小细胞癌P53突变率达100%。18例肺部良性病变，P53基因改变2例，即P53基因突变的假阳性率为11.1%。
3 讨 论
PCR-SSCP是一种单链DNA构象差的快速、敏感而有效的点突变和DNA多态的检测与筛选方法。根据单链DNA具有一定立体构象，并且相同长度的单链 DNA因其碱基顺序不同，甚至单个碱基不同所形成的DNA分子构型的变化，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，其迁移率也不相同，从而判断基因的突变及缺失情况。应用PCR-SSCP研究肺癌病理切片细胞P53突变的报道很多，组织病理P53突变也多见于5～8外显子，其突变（及缺失）率各家报道不一，一般小细胞肺癌80%以上，非小细胞肺癌在50%～80%不等［2.3］。本研究为新鲜痰液细胞学与P53基因同步联检,结果痰液细胞沉渣P53基因5～8外显子突变率达73.7%，高于痰涂片细胞学47.4%，其中小细胞型100%(9/9)，鳞癌66.7%(12/18)，而腺癌63.6%与Mao等［4.5］结果相近。
虽然该法在对照组中还存在一定的假阳性，但灵敏度明显高于细胞学，若联合痰细胞学检查，结果互为补充，可提高该方法的阳性率和准确度。因此，对肺癌患者痰液进行同步病理学检测与基因分析,可提高肺癌诊断率，特别对于病理学阴性的不典型肺癌,当P53基因反复阳性时，应警惕肺癌的可能。
王和英（050011 石家庄铁路中心医院内科）
张晓博（050011 石家庄铁路中心医院内科）
郭丽萍（050000河北医科大学第二附属医院内科）
靳洪涛（050000河北医科大学第二附属医院内科）
参 考 文 献
1，Theodora R,Devere[1] [2] 下一页
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