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脑梗死患者红细胞膜ATP酶活性改变的研究 |
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刘在贵 张丽君 程方敏 毛海燕
脑梗死是危害人类健康最常见的疾病之一，为了有效的预防和治疗脑梗死的发生，必须搞清其发病机制。近年来国外有人报道，细胞膜ATP酶活性与脑血管病有密切关系。我们通过测定红细胞膜ATP酶活性、红细胞变形的改变，探讨其与脑梗死的关系。
1 临床资料和实验方法
1.1 临床资料 实验设对照组和实验组。对照组选健康献血员30例，其中男17例，女13例。实验组选脑梗死患者50例，其中男32例，女18例，平均年龄(64±5.28)岁，平均病程(35.2±20.42)天，并经CT证实诊断，选脑动脉硬化症患者14例，男9例，女5例，平均年龄(60±6)岁。所有病例均符合1995年修订的《各类脑血管病的诊断要点》讨论稿。
1.2 实验方法
1.2.1 红细胞膜的制备：抽取对照组和实验组空腹静脉血2ml，肝素抗凝。300g离心2分钟，吸出血浆层和白细胞，以1∶20体积预冷的50mM Tris-Hcl缓冲液(pH7.4)洗涤红细胞。500g离心3分钟，吸去上层液反复洗涤4次。最后1次离心10分钟，得压积红细胞，再用10mMTris-Hcl缓冲液使红细胞溶血。15000g离心30分钟，吸去上层血红蛋白液，再用10mMTris-Hcl缓冲液洗3次，除去管底沉淀物，即得乳白色红细胞膜，将细胞膜悬浮于75mM蔗糖溶液中，用Lowry法测定膜蛋白含量。
1.2.2 红细胞膜Na＋-K＋ATP酶、Ca-MgATP酶活性测定：取4组小离心管，分别为A：无酶活性对照管；B：Mg-ATP酶活性测定管；C：Ca-MgATP酶活性测定管；D：Na＋-K＋ATP酶活性测定管。反应终体积为250μl。A管中加入5mM MgCl2，0.5mM ATP，0.1mM Ouabain，0.1mM EDTA,50mM Tris-HCl；B管中加入5mM MgCl2,20mM KCl，150mM NaCl,0.5mM ATP，0.1mM Quabain,0.1mMEDTA，50mM Tirs-HCl，80μl红细胞膜悬液；C管中加入5mM MgCl2，0.1mM CaCl2，150mM NaCl，0.5mM ATP，50mM Tris-HCl，0.1mM Ouabain,80μl红细胞膜悬液；D管中加入5mM MgCl2，150mM NaCl，20mM KCl，0.5mM ATP，0.1mM EDTA,50mM Tris-HCl，80μl红细胞膜悬液。反应从加入ATP开始，37℃水溶保温10分钟后，立即置入冰溶中，向各管加入10%三氯醋酸50μl终止反应。在A管中加入红细胞膜悬液80μl，再以三蒸去离子水补足1ml，每分钟3000rpm离心2分钟，去沉淀，上清液中加15%三氯醋酸0.5ml，酸性钼酸钠0.4ml，孔雀绿0.3ml，摇匀，2分钟后加7.8%硫酸2ml，室温下置20分钟，以A管调零，625nm波长处比色，读取吸光度，计算出磷含量，酶活性以nMpi/(mgpr*h)表示。
1.2.3 红细胞变形能力测定：采用微滤筛法，取新鲜血2ml，生理盐水反复冲洗离心，制成4.5%～5.5%压积的红细胞悬液，采用DXC-300型红细胞变形测定仪和美国产核孔滤膜测定，孔径5μm。以滤过指数表示变形能力，滤过指数越大变形能力越差。
1.2.4 统计学处理采用随机化计量资料的方差分析及组间相互比较的q检验。
2 结 果
测定30例正常人和50例脑梗死患者红细胞膜Na＋-K＋ATP酶和Ca-MgATP酶活性及红细胞变形能力，发现脑梗死患者红细胞变形能力降低、该二酶活性明显低于对照组，统计学处理有显著的差异性(见表1)。
表1 脑梗死患者红细胞膜Na＋－K＋ATP酶和
Ca-MgATP酶活性(U)
组 别 例数 Na＋－K＋ATP酶 Ca-MgATP酶
实验组 脑梗死 50
87.23±46.54
634.85±192.17
脑动脉硬化 14 88.34±37.62 636.72±187.24
对照组 30
138.58±49.37
851.23±202.31
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