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内标法测定尿游离皮质醇浓度 |
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陈肖燕 谢鑫友 叶爱青
皮质醇是肾上腺分泌的一种糖皮质类固醇激素，在调节人体糖和蛋白质代谢中起着重要作用。测定24小时的尿游离皮质醇水平是临床评价肾上腺皮质功能的最佳指标，是检测柯兴氏综合征的最有效筛选方法［1］，近年来受到临床的重视。但由于尿液中干扰物质较多及测定方法操作繁琐，故其临床应用受到一定的限制。本法采用胆固醇作为内标物，经抽提后，用最新发展的免疫化学发光法测定尿游离皮质醇，具有操作简单，结果稳定可靠和无放射性污染的优点，适合临床使用。
材料和方法
1.仪器：(1)ACCESS免疫化学发光测定系统(美国产)；(2)CX7全自动生化分析仪(美国产)；(3)MAGEFUGE温控离心机(德国产)。
2.试剂：(1)皮质醇测定试剂和标准液(免疫化学发光法)；(2)胆固醇测定试剂和标准液(胆固醇氧化酶法)；(3)皮质醇质控血清(美国产)；(4)磷酸缓冲液(ph 7.4，0.2 mol/L内含1 g/l牛血清白蛋白)；(5)乙酸乙酯(杭州产)。
3.方法：将标本混匀后测出总量，取10 ml离心(900 g，5分钟，15℃)，取上清液1 ml放入测定管(P)，同时另加0.5 ml水和0.5 ml皮质醇标准液于对照管(S)，然后分别在P管和S管中各加入胆固醇标准液0.4 ml，充分混匀后加入1 ml乙酸乙酯，加盖，混匀，放4℃静止10分钟，然后离心(1500 g，5分钟，15℃)，取上液0.4 ml放置已标记的另一支试管，用N2吹干，加0.4 ml磷酸缓冲液复溶，分别测定皮质醇和胆固醇浓度。
结 果
1.方法的精密度：取三个不同皮质醇浓度的标本各测定10次，并连续5天，结果见表1。
2.线性范围：将一份尿游离皮质醇含量为1617 nmol/L的样品进行倍比稀释测定，在25～1617 nmol/L范围内线性良好y=9.794+0.967x,r=0.998。
3.回收试验：在一份尿游离皮质醇浓度为115 nmol/L的正常人尿液中分别加入不同浓度的皮质醇标准液，使浓度为195，333，747 nmol/L。按本法，实测均值分别为201，330和732 nmol/L，得回收率分别为103%，99%，98%。
表1 方法的精密度
平均浓度 未经内标修正 经内标修正
批内CV 批间CV 批内CV 批间CV
(nmol/L) (%) (%) (%) (%)
131 7.5 9.2 5.5 7.0
680 6.8 8.5 4.9 6.5
1540 6.6 8.3 5.0 6.7
平均值 6.97 8.67 5.13 6.73
两者 批内cvt值=8.798,P＜0.05
批间cvt值=6.318,P＜0.05
4.空白试验：经验证，正常尿、血尿(红细胞10～200个/HP)、蛋白尿(1+～3+)，均不含胆固醇，故对测定无影响。
讨 论
尿成份复杂，干扰物质多，若直接测定游离皮质醇，往往结果偏高［2］。为了保证结果正确，就需要预先用有机溶剂对样本进行抽提处理。而内标对比法是解决这一问题的最好方法之一，内标对比法的关键是寻找适合的内标物，内标物的选择必须符合下列条件［3］：其化学结构和待测物相似，但不能干扰待测物的测定，必须是样品中不含有的组分，有较纯的标准品。
本法测定正确快速，精度高，成本低，不会增加测定成本和影响结果报告时间。保证了结果的可靠性，并且各项实验参数均符合方法学要求，是一个值得推荐的方法。
作者单位：浙江大学医学院附属邵逸夫医院 310016
参 考 文 献
1 林其燧，等译.临床化学诊断方法大全.北京：北京大学出版社，1990.196.
2 Moore A,et al.Cortisol Assays:guidelines for the provision of a clinical biochemistry service.Ann clin Biochem,1985,22:435.
3 Carl A,et al.Tietz textbook of clinical chemistry.2nd edition.USA.saunders Company,1994.219.
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