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经颅磁刺激用于实验性脑缺血的安全性研究 |
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经颅磁刺激用于实验性脑缺血的安全性。
1 材料与方法
1.1 实验动物 Wistar大白鼠30只，雌性，体重150～250 g。
1.2 仪器和试剂 ①仪器：局部脑血栓形成装置，LSD-Ⅰ型多色双束冷光源仪(金属卤化物灯，锦州光学仪器厂产品)、光照度计、脑立体定位仪(江湾Ⅱ型)、消毒铜片(1 cm×0.8 cm，中心有0.8 cm×0.5 cm的窗孔)；经颅磁刺激器及刺激线圈，圆形线圈，外径12 cm，其在磁刺激器的最大输出强度下产生的脉冲磁场的强度峰值为1.9 Tesla。丹麦Dantec公司产品；肌电图仪，丹麦Dantec公司产品，与经颅磁刺激器连接，作为外部设置控制经颅磁刺激的刺激频率；水浴恒温箱，北京医疗设备厂产品；局部脑血流量(rCBF)测量仪，LS-Ⅲ型，由北京市神经外科研究所研制。②试剂：四氯四氮荧光素二钠，又名玫瑰红B，(RB, Rose Bengel)实验用光敏感染料；氯化三苯基四氮唑，简称TTC染液。
1.3 方法 ①造模：参考Watson等［9，10］的光化学诱导局部脑血栓形成的方法，将30只Wistar大鼠全部制造成局部脑缺血的动物模型。②动物分组：将30只造模动物随机分成3组，每组10只。第1组为对照组；第2组为治疗组Ⅰ；第3组为治疗组Ⅱ。③磁刺激：2个治疗组均于造模后24～48 h开始治疗，连续16 d，每天30个脉冲刺激，分2次完成，中间间隔2 min。治疗组Ⅰ刺激条件为0.5 Hz，70%的最大输出强度；治疗组Ⅱ的刺激条件为1 Hz，100%的最大输出强度。④一般情况观察：观察大鼠在实验期间的生命体征、对磁刺激的反应以及刺激后的反应等。
1.4 评定 ①行为评价：造模后24 h、第2、3、7、16 d观察大鼠行为及肢体运动情况，并按Bederson法［11］分级。②rCBF测定：第16 d，各组取7只鼠用组织血流仪采用氢清除法测定皮层梗死区的rCBF［12］。③TTC染色：第16 d，全部鼠取脑放入用0.2 M磷酸缓冲液(PH7.6)临时配制的2%的TTC溶液中，避光置于37℃温箱中孵育30 min。④组织学检查：TTC染色后各组取9只，经被TTC染色证明为梗死灶部位的脑组织行冠状切片，常规脱水、石蜡包埋，用苏木素-伊红染色，光镜检查。⑤统计分析：数据采用Excel软件处理。
2 结果
一般情况观察：试验期间，全部大鼠精神状态良好，食欲正常，无伤口感染。治疗组Ⅰ及Ⅱ在磁刺激过程中有惊恐的表现，如不安静，试图逃跑，偶有尖叫，一旦停止刺激即恢复正常；磁刺激脉冲致大鼠全身及尾部剧烈振动，刺激停止后振动消失，无抽搐及癫痫样症状发作。
行为学评分：按Bederson评分标准，各组试验大白鼠神经缺失征在所检的各个时点均为0级。
组织形态学的结果：①肉眼，造模后16 d，脑行TTC染色后，正常的脑组织被染成均匀的砖红色，在造模区域可见陈旧的瘢痕，色泽深暗，边缘皱缩，局部轻度凹陷不平。各组间在病灶的形态、大小及色泽方面基本一致。②光镜，各组病灶周围正常脑细胞的层次结构正常，未见明显的水肿、炎性浸润及坏死。治疗组Ⅰ及Ⅱ在病灶及周围正常脑组织内均未见到出血病灶；对照组病灶表面由增生的脑膜覆盖，周围由胶质细胞增生包裹，机化病灶形成胶质瘢痕，其中夹杂有少量的以淋巴细胞为主的炎性细胞，在脑膜层及病灶局部可见毛细血管。治疗组Ⅰ和Ⅱ的病灶修复的成分与对照组相同，只是脑膜层次少于对照组，毛细血管的数目较对照组多，其中治疗组Ⅰ比治疗组Ⅱ毛细血管的数目更多。③rCBF测定，用X+/-S表示，对照组为92.139+/-4.594，治疗组Ⅰ和Ⅱ分别为96.29+/-5.177和98.52+/-4.836，分别较对照组上升4.51%+/-5.62%和6.93%+/-5.25%，对照组与治疗组Ⅰ间、对照组与治疗组Ⅱ以及对照组与总的治疗组之间的差异有显著性意义，P＜0.05；治疗组Ⅰ和Ⅱ之间的差异无显著性意义，P＞0.05。
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