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脐血清中IL |
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刘长安 贾廷珍 邵玉霞
随着近年来脐血实验与临床研究的不断进展,脐血移植(CBT)用于治疗恶性肿瘤及遗传性疾病初步展现出广阔的前景。与骨髓移植相比,脐血移植后移植物抗宿主病(GVHD)发生率及严重程度均较低［1］。本文采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了足月正常分娩新生儿脐血清白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNFα)及可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的表达水平,并与健康成人外周血清进行比较,以期进一步探讨脐血的免疫学特性,为脐血的临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 标本 选择无妊娠高血压综合征,无胎膜早破、无贫血、肝功能正常、HBsAg(-)的产妇,37～42周足月正常分娩新生儿脐血;成人外周血采自我院健康献血员。不抗凝血收集于无菌离心管中,2000rpm离心20分钟,吸取血清分装于eppendorf管中,-25℃冻存,临用前融化。
1.2 试剂与仪器 人TNFα、IL-2、sIL-2R ELISA试剂盒(GENZYME公司出品,晶美公司分装)。DG3022型酶联免疫检测仪(南京华东电子管厂)。
1.3 方法 均采用双抗体夹心法ELISA(以IL-2为例):抗人IL-2单抗预包被于酶标板上。加入标本/标准品和生物素化抗体,25℃孵育120分钟,两抗体与标准品/标本中的IL-2形成抗体-IL-2-抗体复合物。洗去游离成分。加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,25℃孵育60分钟,生物素与亲合素特异结合。洗去游离成分。加入四甲基联苯胺(TMB),25℃孵育15分钟,若反应孔中有IL-2,将有蓝色出现,加终止液变黄。在450nm处测吸光度A。绘制标准曲线求出IL-2浓度。
1.4 统计学处理 各类指标数据均用±s表示,采用t检验和相关检验进行统计学分析。
2 结 果
2.1 脐血清中IL-2及TNFα表达水平 显著低于成人外周血(P均<0.01),而脐血清中sIL-2R平均浓度相当于成人外周血的2倍,显著高于成人外周血(P<0.01),见表1。
2.2 脐血清中IL-2与sIL-2R表达水平之间呈负相关(r=-0.328,P<0.05)。
表1 脐血清与成人外周血清中IL-2、TNFα、
sIL-2R水平的比较(±s)
标本 样品数量n IL-2
(pg/ml) TNFα
(pg/ml) sIL-2R
(pg/ml)
IL-2 TNFα sIL-2R
脐血清 40 42 40 181.4±113.3 5.51±0.92 214.0±96.1
成人外
周血清 37 35 37 305.2±125.4 7.45±1.58 112.1±72.5
t值 4.49 6.63 5.29
P值 <0.01 <0.01 <0.01
3 讨 论
IL-2主要由T细胞,尤其是辅助性T(Th)细胞亚群中Th1产生,其生物功能多样,是机体中主要调节性细胞因子之一,刺激T细胞、B细胞、NK细胞的生长分化［2］。脐血清中IL-2水平显著低于成人外周血,反映脐血Th1细胞分泌细胞因子功能较弱,同时可能是脐血下列免疫学特性的主要原因之一:脐血T细胞中的CD+4亚类比例相对较高,但其免疫调节功能以抑制效应占主导;脐血中的GVHD的主要效应细胞-CD8+T细胞比例和NK细胞活性显著低于成人外周血;B细胞中未成熟亚类占优势［3,4］。
人TNFα为单核巨噬细胞产生的一种多肽类细胞因子,通过其受体发挥作用。脐血清TNFα水平较低,可能与单核细胞HLA-DR抗原表达较弱有关,而DR抗原在移植后的GVHD中起重要作用［5］。低水平的TNFα有助于下调T细胞MHCI类抗原表达。
sIL-2R是膜结合形式IL-2Rα链的脱落物,高浓度抑制、低浓度可刺激依赖IL-2的细胞增殖效应,表现出双重免疫调节功能［6］。研究表明,脐血清中sIL-2R浓度显著高于成人外周血,平均值为后者的2倍;[1] [2] 下一页
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