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局部脑缺血 再灌流损伤与氧自由基的关系 |
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系已有研究， 但模拟临床常见局部脑组织缺血、再灌流损伤关系的研究国内未见报导。 因此本文采用经颈内动脉插入栓子，栓塞大脑中动脉，造成可复血流的局灶性脑缺血、再灌流损伤模型，观察生物化学、自由基代谢，组织结构改变及应用自由基清除剂的保护作用,为抗自由基治疗提供依据。
1 材料和方法
1.1 主要仪器和试剂
仪器：KAPS手术显微镜(西德)、Beckman-Du临床生化分析仪(美国)、721-分光光度计(上海)、BH-20ly显微镜(日本)、H-600 电子显微镜(日本)。
试剂：黄嘌呤氧化酶(Sigma公司)、肌酸磷酸激酶(CPK)测定试剂盒(北京化工厂)、硫代巴比妥酸(上海试剂二厂)。
1.2 动物模型制作
Wistar大鼠30只，体重180～250g，1%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉，同时腹腔内注射阿托品1ml以减轻呼吸道分泌物。 大鼠仰卧位固定，吸氧，颈部切口暴露左侧颈总动脉(CA)、颈外动脉(ECA)， 颈内动脉颅外段（ICA），在ECA近CA分叉处剪一切口，将栓子（尼龙绳线，6～0号，长20mm），向ICA颅内方向插入17.5～18mm遇阻力而停止，栓子头端即达MCA起始部，用Zin氏夹夹闭ECA切口近端，缝合皮肤,栓塞即告完成。再灌流时，在戊巴比妥钠麻醉下，去除Zin氏夹，自ICA取出栓子,使ICA、MCA内血流恢复， 整个手术过程在手术显微镜下操作，术后1小时，大鼠清醒，置单笼饲养，根据Berderson氏检查评级方法观察记录，大鼠清醒后爬行，不能走直线，而呈弯向血管（栓塞侧）对侧的环状爬行为Ⅲ级。
1.3 分组
实验动物随机分为5组，每组6只。第一组为正常组；第二组为假手术对照组；第三组为缺血组，缺血6小时；第四组为再灌流组，缺血5小时，再灌流1小时；第五组为治疗组，缺血5小时，再灌流即刻由尾静脉注入20%甘露醇(2g/kg)和VitC(0.4g/kg)1小时。
1.4 测定指标及方法
取材：第一组，自心脏采血2ml作正常对照；第二组，手术操作6小时取血；第三～第五组，6小时后取血。在心脏采血的同时，断头处死，迅速取左侧大脑半球颞叶皮层脑组织作丙二醛(malondialdehyde，MDA)测定(组织中)。
肌磷酸激酶(CPK)活力测定：心脏采血2ml，离心(2000r/min)，取血清50ul，用Beckman-Du型生化分析仪测CPK活性。
MDA测定：硫代巴比妥酸分光光度法(TBA)测定〔4〕。
超氧化物歧化酶(SOD)活力测定：Oyangui亚硝酸盐法〔5〕。
大鼠脑组织蛋白测定：Lorry法。
1.5 组织结构和细胞超微结构观察
各组另取2只动物，处死后迅速取脑组织标本(左大脑半球缺血区)，以中线旁开2mm离嗅球1～1.5cm处取材,分送光、电镜检查。
1.6 统计学分析
所有资料均以±s表示，各项数值间采用均数和配对t检验，P<0.05视为差异显著。
2 结果
大鼠术后1小时清醒，神经功能均为Ⅲ级。
2.1 大鼠血清中CPK活性的变化
与对照组比较，缺血组、再灌流组与治疗组的CPK活性升高(P<0.01)；再灌流组与缺血组比较，CPK活性升高(P<0.01)；治疗组与再灌流组比较,活性下降(P<0.01)。见表1。
2.2 大鼠血清中MDA含量变化
与对照组相比，再灌流组MDA含量升高(P<0.005)；与缺血组比较，再灌流组MDA含量升高(P<0.01)；与再灌流组比较，治疗组MDA含量明显下降(P<0.005)。见表2。
2.3 大鼠脑组织MDA含量变化
与对照组比较,再灌流组MDA含量升高，(P<0.01)；与缺血组比较,再灌流MDA含量升高，(P<0.05)；与再灌流组比较,治疗组MDA含量下降(P<0.05)。见表3。
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