【摘要】 目的 观察大肠癌患者和接种Colon26细胞小鼠的Th1/Th2平衡偏移情况，同时以IL21调整小鼠Th1/Th2平衡，观察调节细胞免疫平衡对大肠癌的影响。方法 随机选取30例大肠癌患者，采用流式细胞仪测定Th1/Th2细胞比值及血清中IFNγ和IL4浓度。另于小鼠爪垫内侧皮下接种高分泌IL21的Colon26/IL21细胞，对比观察小鼠肿瘤生长情况及对机体免疫平衡状态的影响。结果 ①30例大肠癌患者和30例正常人Th1/Th2比值分别为0.74±0.27和1.26±0.9;血清IFNγ浓度的测定值分别为(6.26±1.43)和(9.18±2.31)pg/ml;IL4浓度的测定值分别为(8.88±1.30)和(5.20±1.71)pg/ml;IFNγ/IL4比值的测定值分别为0.70±0.10和1.82±0.35，两者差异明显。②接种Colon26/IL21细胞组小鼠肿瘤持续生长至16 d后逐渐缩小，小鼠血清中IFNγ浓度明显高于对照组;接种Colon26细胞组小鼠肿瘤持续生长增大，血清中IL4浓度高于Colon26/IL21细胞组;免疫平衡向细胞免疫方向转变。结论 大肠癌患者与正常人相比细胞免疫功能下降，免疫平衡(Th1/Th2平衡)向Th2型偏移;IL21可以增强Th1型细胞免疫功能，调节Th1/Th2细胞比例，纠正免疫失衡，有效发挥杀灭肿瘤细胞。
【关键词】 免疫平衡;IL21;大肠癌; Colon26细胞
恶性肿瘤的发生发展常与机体的免疫功能低下有关，调节肿瘤患者机体免疫平衡，增强其细胞免疫功能有助于改善治疗效果。白介素21(IL21)主要由活化的CD4+T细胞分泌的Ⅰ型细胞因子，能够促进T细胞、NK细胞、树突细胞的增殖、分化并能提高NK细胞的杀伤活性，加强机体细胞免疫功能。本研究旨在通过流式细胞学和ELISA方法对比观察大肠癌患者与正常人之间免疫功能的差异;并通过调节机体分泌IL21水平，观察免疫平衡状态的变化以及抑制肿瘤生长的作用。
1 资料与方法
1.1 临床实验标本的采集
随机选取本院院外科经病理证实的住院结肠癌患者30例，其中男17例，女13例，年龄29～74岁，中位年龄为61岁，病例排除标准：①无应用任何免疫制剂;②肠梗阻合并白细胞升高;③无合并其他部位感染;④伴乙型肝炎、类风湿关节炎、甲状腺功能亢进等与免疫相关的疾病;对照组30例均为健康人，男17例，女13例，年龄28～70岁，中位年龄为63岁，与大肠癌患者在性别、职业、年龄等方面均具有可比性(P﹥0.05)。标本采集均为空腹静脉血。血标本分成两部分：A用促凝管采血1 ml，1 500 r/min离心10 min，提取血清，80℃保存备用;B用EDTAK2抗凝的无菌试管采血1 ml，采血后即刻送实验室进行实验。
1.2 实验动物、细胞株
清洁级Balb/c雌性小鼠共90只，体重25 g左右,均购自河北医科大学实验动物中心(合格证编号：701147)。小鼠结肠低分化腺癌Colon26细胞株、转染IL21基因的Colon26细胞株(Colon26/IL21细胞)由本院科研中心单保恩教授惠赠。
1.3 主要仪器及试剂
EpicsXLⅡ型流式细胞仪，NU400400E超净工作台，倒置显微镜，高速低温离心机，CHIBITANⅡ型微量离心机，凝胶成像分析系统 ，UV2201型紫外分光光度计，DFCII型电泳仪，80℃超低温冰箱，PCR扩增仪，酶联免疫检测仪。人IFNγ、IL4、小鼠IFNγ、IL4定量ELISA试剂盒由晶美生物工程有限公司(北京)提供;FITC标记的抗CD4单抗(CD4FITC)、PE标记的抗IL4单抗(IL4PE)、PE标记的抗IFNγ单抗(IFNγPE)、佛波醇乙酯、离子霉素、蛋白转运抑制剂由美国BD公司提供;0.1%Triton X100由美国Sigma公司提供;RPMI1640培养基由Gibco公司提供;Trizol 由Invitrogen 生物技术公司提供;RTPCR酶混合物由华美生物工程公司提供;小鼠IL21基因上、下游引物由华美生物工程公司合成，上游引物为5 GAGGACCCTTGTCTGTCTGG3 ，下游引物为5 TCATCTTTTGAAGGAGCCATTT3 ;DNA Marker由北京鼎国生物公司提供。
1.4 结肠癌患者外周血Th1、Th2细胞检测
取患者抗凝血1 ml，以PMA、离子
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