NF Bp 65和HIF 1 在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

　　1 材料与方法

　　1.1 临床资料

　　随机选取2006年10月至2008年4月在青海大学附属医院肿瘤妇科住院治疗的56例宫颈鳞癌患者的手术切除标本(取标本前未行放、化疗)。中位年龄48岁(26～69岁) ; 藏族妇女25例，汉族妇女31例;根据国际妇产科联盟( FIGO) 分期标准判定,其中原位癌(0 期) 5例, I 期17 例, II 期21例，Ⅲ期13例;根据WHO标准组织分级标准判定，Ⅰ级(高分化)16例，Ⅱ级(中分化)21例，Ⅲ级(低分化)19例。正常对照组25例,中位年龄42岁(32～54岁) ,标本为子宫肌瘤患者行手术切除的正常宫颈组织，标本均经组织病理学确诊。

　　1.2 主要试剂

　　NF-κB p65单克隆抗体浓缩液购自Santa Cruze 公司; 鼠抗人HIF-1α单克隆抗体、PV-9000 二步法免疫组化检测试剂及浓缩型DAB 底物试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.3 实验方法

　　标本来自青海大学附属医院病理科宫颈癌瘤组织石蜡标本，所有标本连续切片3张，厚4 μm。NF-κB p65、HIF-1α检测均采用PV-9000二步法免疫组织化学方法检测，具体步骤参照说明书进行。NF-κB p65浓缩液稀释100倍使用，HIF-1α为工作液。以正常宫颈组织为阴性对照，以PBS液替代一抗作空白对照。

　　1.4 结果判定

　　NF-κB p65、HIF-1α免疫组化染色均以细胞核或细胞浆染成棕褐色或黄色者为阳性。见图1及图2。双盲法随机选取5个高倍镜(×400)视野进行计数及评分。根据染色显色强度与及阳性细胞比例进行综合评分[4] : ①根据着色深浅评分:无色或蓝色为0 分,浅黄色为1 分,棕黄色为2 分,棕褐色为3 分; ②着色细胞占计数细胞百分率: ≤5 %为0 分, > 5 %～25 %为1分, >25 %～50 %为2 分, > 50 %为3 分; ③染色分值综合判断: 阳性细胞着色深浅分值( ①与②的积) , 结果0 分为阴性,1～3 分为+ ,4～6 分为+ + , 9分为+ + + 。

　　1.5 统计学方法

　　应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，统计推断采用χ2检验和Spearman 等级相关分析，以 P<0.05作为差别有显著意义的检验标准。

　　2 结果

　　2.1 NF-κB p65、HIF-1α在宫颈组织中的表达

　　NF-κB p65、HIF-1α均可在细胞核和细胞浆中呈阳性表达，其表达率分别为69.6%(39/56)，71.4%(40/56)，以上两者与对照组正常宫颈组织相比，差异均有统计学意义(P<0.01)。详细结果见表1。 表1NF-κB p65、HIF-1α在宫颈鳞癌和正常宫颈组织中的表达

　　2.2 NF-κB p65、HIF-1α在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理因素的关系

　　NF-κB p65的过表达与宫颈鳞癌的分化程度及盆腔淋巴转移有关，差异有统计学意义，P<0.05;但与年龄、临床分期及民族差异无显著性，P>0.05。而HIF-1α的蛋白表达与患者的临床分期及有无淋巴转移相关，差异有统计学意义，P<0.05;与年龄、组织学分级以及民族差异无显著性，P>0.05。详细结果见表2。表2NF-κB p65、HIF-1α与宫颈鳞癌的临床病理指标关系

　　2.3 宫颈鳞癌组织中NF-κB p65与HIF-1α蛋白表达的相关性

　　Spearman 等级相关分析显示，NF-κB p65的表达与HIF-1α的表达呈明显正相关(rs=0.584,p=0.001)。详细结果见表3。表3NF-κB p65、HIF-1α在宫颈鳞癌组织中表达的相关性分析

　　3 讨论

　　本研究结果显示NF-κB p65在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率明显高于正常宫颈组织(P<0.01)。在高、中、低分化的宫颈鳞

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