genic and adipogenic differentiation mediums.c)Alkaline phosphatase assays(ALP) were different of these two groupsALP of inducedgroups was higher than that of noninduced group at each different time(P<0.05，n=5) and ALP of the inducedgroup was distinct in different tendency under different induction(P<0.05，n=5).Calcium concentration were different of these two groupscalcium concentration of inducedgroups was higher than that of noninduced group at each different time(P<0.05，n=5)and calcium concentration of the induced group was distinct in different tendency under different induction(P<0.05，n=5).Conclusion This study suggests that ADSCs can be isolated and cultured easily and have the property of fast generation and favourable osteogenic differentiation，which makes ADSCs ideal seed cells of bone tissue engineering.
Key words：adiposederived stem cells;osteogenic differentiation;alkaline phosphatase assay;calcium ion
脂肪源性干细胞(adiposederived stem cells，ADSCs)是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。研究发现这些细胞能够在体外稳定增殖且衰亡率低，同时它具有来源丰富、
基金项目：南京军区医学科学技术研究“十一五”计划资助项目(06MA137)
取材容易、少量组织即可获取大量干细胞、低免疫源性、不涉及道德伦理问题等优点，此外，已证实其具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、心肌细胞、神经细胞和内皮细胞等方向分化的能力[1，2]。因此，ADSCs是一种很有前景的组织工程种子细胞，具有非常重要的研究价值。本实验通过研究兔脂肪干细胞的分离、培养、鉴定以及体外成骨、成脂诱导分化过程，为其能够作为骨组织工程理想的种子细胞提供实验基础。
1 资料与方法
1.1 材料
3个月龄新西兰白兔(福州总院实验动物中心)，低糖、高糖Dulbeco改良的MEM培养液(dulbeco′s modifild eagle medium，DMEM)(Gibco公司)，Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶、地塞米松、L抗坏血酸、β甘油磷酸钠、胰岛素、3异丁基1甲基黄嘌呤(3isobutyl1methylxanthine，IBMX)、吲哚美辛、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(Sigma公司)、标准胎牛血清(杭州四季青)，CD44、CD45抗体、正常山羊血清(武汉博士德)，FITC标记羊抗小鼠IgG(北京中杉金桥)，碱性磷酸酶染色试剂盒、碱性磷酸酶检测试剂盒、钙离子检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司)，培养瓶、6孔、12孔及96孔板(Costar公司)。
1.2 方法
1.2.1 ADSCs的原代培养、传代培养
取3个月龄新西兰白兔，雌雄不限，速眠新0.2～0.3 mL/kg肌注麻醉后，备皮，消毒。取颈后部正中切口，无菌切取皮下脂肪组织，清除肉眼可见的小血管，尽可能去除包膜及结缔组织后用PBS清洗3次以去除红细胞。眼科剪将组织剪成1～2 mm3组织块，置于2倍体积0.1%Ⅰ型胶原酶，37℃消化60 min后加入等体积含10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的DMEM终止消化，200目筛网过滤，1000r/min离心10 min，去上清，加入含10%FBS的DM
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