了牛蒡子药材的可利用度,同时也可作为其质量控制的指标之一。
3.2 对绿原酸对照品溶液在200~400 nm处进行紫外光谱扫描检测,结果显示绿原酸在217、240、327 nm处均有最大吸收,选择干扰较少的327 nm作为检测波长。
3.3 对不同比例的乙腈H3PO4水溶液[4]作为流动相的分离效果进行了考察,发现当二者的体积比为10∶90,绿原酸与相邻杂质峰分离效果最好,保留时间适中。H3PO4水溶液的体积分数为0.4%时,峰形对称。因此,选择乙腈体积分数0.4% H3PO4水溶液(体积比10∶90)作为流动相。
3.4 小儿清热利肺口服液为11味中药组成的大复方,成分非常复杂,因而,供试品制备方法的选择难度较大。曾尝试用甲醇对样品液进行超声提取,提取液直接进样检测。检测结果表明,绿原酸峰与其它杂质峰达到基线分离耗时较长,且由于目标峰后还有较多杂质峰,为不干扰下一样品的检测必须等待90 min以上才可进样。为改善分离效果,对甲醇提取液采用中性氧化铝柱柱与大孔吸附树脂[5]进行纯化,结果发现,二者分离纯化的效果并不理想,且操作繁琐。故尝试使用溶剂萃取法对样品进行处理,并对乙酸乙酯与水饱和正丁醇的萃取[2]效果进行了比较。结果表明,2种溶剂所得萃取液的色谱图基本相同,峰形、峰时一致,但乙酸乙酯萃取液的峰面积较小,说明乙酸乙酯萃取时绿原酸损失较多,其主要原因是绿原酸微溶于乙酸乙酯。因此,确定样品采用水饱和正丁醇萃取,不仅能有效去除杂质,且绿原酸损失较少,操作简便、快速。
对萃取溶剂用量与萃取次数考查结果表明,20倍水饱和正丁醇萃取2次与15倍水饱和正丁醇萃取3次所得萃取液中绿原酸的含量较低;10倍水饱和正丁醇萃取3次较20、30倍水饱和正丁醇萃取3次所得萃取液中绿原酸的含量低;10倍水饱和正丁醇萃取4次所测得绿原酸含量与20、30倍水饱和正丁醇萃取3次的含量基本一致,且高于5倍水饱和正丁醇萃取4次的含量。因此,确定水饱和正丁醇用量为10倍量,萃取次数为4次。
3.5 本研究建立的绿原酸含量测定方法简便快速、分离度好、灵敏度高,可用于小儿清热利肺口服液的质量控制。
【参考文献】
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