on group(P<0.05). Conclusion: Abnormal expression of IGFI，IGFIR is closely related to degenerative intervertebral discs; IGFI and IGFIR promote cell proliferation and inhibit intervertebral discs cell apoptosis, which has an important effect on the degeneration of intervertebral discs. Abnormal expression of IGFI,IGFIR can induce degeneration of intervertebral discs.
[Key words] insulinlike growth factorI; insulinlike growth factorI receptor; intervertebral disc degeneration
椎间盘退行性变(intervertebral disc degeneration，IDD)在成人中有较高的发生率，传统的观点认为IDD与过度的身体负荷引起的损伤有关。有研究显示IDD的主要机理可能是椎间盘细胞衰老、凋亡。椎间盘活性细胞减少及随之而来的细胞外基质合成减少和成分改变，是导致IDD的病理学基础，而椎间盘细胞过度凋亡是导致椎间盘细胞减少的直接原因[1]。胰岛素样生长因子(insulinlike growth factor ，IGF)与椎间盘细胞外基质变化和椎间盘细胞增殖、凋亡密切相关[2]。IGFI及其受体(IGFIR)，作为IGF家族重要成员与结合蛋白和结合蛋白酶共同构成IGF轴，它们在促进细胞生长、有丝分裂及抗凋亡方面具有十分重要的作用[3]。本研究通过免疫组化SP法检测IGFI、IGFIR、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)在人退行性变腰椎间盘组织中的表达，TUNEL法检测椎间盘细胞凋亡情况，探讨IGFI、IGFIR在人椎间盘退行性变中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集2008年7月至2009年9月东南大学附属马鞍山市人民医院病理科腰椎间盘组织存档蜡块69例。其中16例为没有腰痛病史、影像学及病理学证实椎间盘没有退行性变、椎体爆裂性骨折患者的椎间盘组织，作为正常对照组(A组)，包括男10例，女6例，年龄20～40岁,平均(28.2±6.2)岁。余53例均为术前经CT或(和)MRI诊断为腰椎间盘突出症、术后病理学检查证实为退行性变腰的椎间盘组织，作为退变椎间盘组(B组)，包括男26例，女27例，年龄33～71岁,平均(48.6±10.5)岁。所有患者均未行硬膜外封闭、化学溶核、经皮穿刺髓核切吸术、放化疗及免疫治疗。所有手术均采用腰椎后路标准术式，同法获取椎间盘组织。
1.2 试剂
兔抗人IGFI、IGFIR多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司;兔抗人PCNA多克隆抗体，SP、TUNEL检测试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。
1.3 方法
石蜡标本，4 μm厚连续切片分别用于免疫组化(SP)法及TUNEL检测，具体步骤见试剂盒说明书。以PBS液代替一抗作阴性对照，用已知阳性片作阳性对照。IGFIR为细胞膜受体，在细胞内生成，变构后转移至膜上，细胞浆内、细胞膜上均有表达。IGFI则主要在细胞浆内表达。如试剂说明书所示，显微镜下，IGFIR阳性着色主要位于细胞浆、细胞膜，IGFI阳性着色主要位于细胞浆，均以出现棕黄色颗粒判定为阳性细胞。高倍镜下(×400)随机观察5个视野，以阳性细胞百分率和染色强度为判定标准，阳性细胞≤30%为阴性(-)，31%～50%为弱阳性(+)，51%～80%为阳性(++)，≥81%为强阳性(+++)[4]。细胞增殖指数(proliferative index，PI)以平均每100个细胞中PCNA阳性细胞数来判断。TUNEL法检测细胞凋亡，以凋亡指数(apoptotie index，AI)即平均每100个细胞中凋亡细胞数来判断结果。
1.4 统计学处理
应用SPSS 12.0统计软件进行数据处理，采用χ2检验、t检验及Spearman相关分析法进行统计分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结
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