CT 1对神经再支配骨骼肌功能恢复的促进作用

　　1.2 方法

　　1.2.1 动物模型的建立和给药方法 5 g/L的硫喷妥钠腹腔注射麻醉，显微镜下解剖出胫神经上段后切断胫神经干，将两断端移开，用8-0的无创线分别固定于邻近的股二头肌表面，防止神经断端回缩或自行愈合，并各留一长线头作为标记，缝合切口。将胫神经切断后的60只小鼠，随机分成2组，每组30只，送回动物房饲养。实验组小鼠每日腹腔注射rmCT-1 (CT-1注射组)100 μg/kg，对照组每日腹腔注射等量CT-1溶媒。1个月后，停止给药，再次手术，行胫神经修复。从原切口进入，分别在股二头肌表面找到胫神经远、近端，修剪神经断端瘢痕直至出现正常的神经束后，以11-0无创伤尼龙线作神经端端缝合，关闭切口后继续饲养。

　　1.2.2 腓肠肌复合肌肉动作电位和坐骨神经诱发电位潜伏期的测定 分别将动物饲养4、8和12周后，以5 g/L的硫喷妥钠行腹腔注射麻醉，显露修复后的胫神经和近侧的坐骨神经主干，以及相应的靶肌肉——腓肠肌。同心针电极插入腓肠肌，刺激电极于神经吻合口近侧2 cm处刺激坐骨神经，检测神经再支配后腓肠肌复合肌肉动作电位(CMAP)和神经诱发电位潜伏期(Lat)，以对侧正常胫神经和腓肠肌作为对照组。电刺激和记录参数如下：方波;持续时间0.1 ms，刺激强度0.3 mA，刺激频率1 Hz。

　　1.2.3 腓肠肌肌张力的测定 实验小鼠进行完电生理检测后，解剖并完全显露出腓肠肌，在近止点处将跟腱切断，向近侧游离腓肠肌，保护好腓肠肌的血管神经束。用1-0丝线将跟腱断端连接到肌张力换能器的力臂上，换能输出线与二道生理记录仪相连。刺激电极位置在坐骨神经主干，调整记录仪敏感度，肌肉张力定标2.0 g，肌肉收缩力的方向与换能力臂上的弹片垂直。单刺激的刺激量为3.84 V，时程1 s，频率1 Hz;强直收缩的刺激量为3.84 V，时程10 s，频率50 Hz。根据记录仪上描记出的收缩曲线，测量肌张力，并与对照组比较。

　　1.2.4 有髓神经纤维计数 按照不同组别，分别切取胫神经吻合口以远5 mm的再生胫神经标本5 mm，甲醛溶液固定后，石蜡包埋、切片，快蓝染色。所得切片每隔3张取一张，连取5张，应用Leica FW 4000图像分析软件进行分析，计算有髓神经纤维数，观察再生轴突数目随时间的变化,并与对照组比较。

　　1.3 统计学分析

　　资料由复旦大学上海医学院卫生统计教研室用SPSS 11.0软件处理。数据采用x±s表示。两组间比较行t检验。

　　2 结 果

　　2.1 胫神经吻合口远端有髓神经纤维数量

　　各组术后不同时间胫神经再生轴突数目比较见表1。结果显示，胫神经断端重新吻合后4周，已经可见到再生的神经轴突，随着时间的延长，再生的神经纤维数逐渐增多。CT-1注射组4、8、12周再生神经轴突数目明显多于对照组(t=7.10～10.80,P<0.01)。

　　2.2 外源性CT-1对再生神经Lat和再支配骨骼肌CMAP的影响

　　各组术后不同时间再生胫神经Lat检测结果见表2，可以看出，随着神经修复后时间的延长，再生胫神经的Lat逐渐缩短，至3个月时，已接近正常值。两组各个时间点Lat比较差异无显著性(P>0.05)。但对神经再支配腓肠肌的CMAP检测结果显示，神经修复前CMAP测不出。在神经修复后4、8、12周，均可测出CMAP，各时间点两组CMAP比较差异有显著性(t′=19.99～32.00，P<0.01)，见表3。

　　2.3 外源性CT-1对神经再生后腓肠肌肌张力的影响

　　各组术后不同时间腓肠肌单刺激收缩力比较见表4。可以看出，随着神经修复后时间的延长，CT-1注射组单刺激坐骨神经腓肠肌肌张力逐渐增大。CT-1注射组4、8、12周的肌张力比对照组明显增高(t′=6.39～43.36,P<0.01)。各组术后不同时间腓肠肌强直收缩力的比较见表5，CT-1注射组4、8、12周肌张力比对照组明显增高(t′=6.39～43.36,P<0.01)。表1 两组再生神经轴突数目比较表2 两组小鼠胫神经修复后不同时间的潜伏期比较表3 两组小鼠胫神经修复不同时间腓肠肌CMAP比较表4 单刺激坐骨神经两组腓肠肌肌张力比较 表5 强直刺激坐骨神经两组腓肠肌肌张力比较

　　3 讨 论

　　骨骼肌是周围神经系统的靶器官，其结构和功能均受到运动神经的支配和调节，以及各种细胞因子的营养。一旦失去神经支配，骨骼肌不仅丧失了来自运动神经的神经冲动，同时正常完整的运动神经元所产生和分泌的营养因子

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