股骨头坏死模型的制备及修复实验：新西兰白兔术区备皮，手术台俯卧位固定，速眠新肌注麻醉下，取髋关节外侧斜形切口，长约4 cm，切开皮肤、皮下、深筋膜，分开臀中肌，显露髋关节囊，T型切开关节囊，可见股骨头外上部分。不切断圆韧带，内收下肢，增加股骨头暴露部分。后在保护股骨头周围组织的情况下，用棉棒反复沾取液氮，持续紧贴股骨头3 min。再用温生理盐水复温1 分钟。随后从股骨头基底向液氮冷冻部钻孔，直达软骨下2 mm，形成一直径3.5 mm的腔隙。对照组将单独的异种骨植入，实验1 组植入复合骨髓基质干细胞的异种骨，实验2组植入复合骨髓单个核细胞的异种骨。完成处理后，逐层关闭切口。术毕分笼饲养，肌注青霉素40 万U/d，持续5 天。所有实验用兔，统筹安排，选取适当手术和处死时间，处死后，先行影像学检查，再取股骨头做其他检查。
1.3 主要观察指标
X射线检查：术后2，4，8 周，处死实验用兔取俯卧位摄髋关节正位片。观察股骨头密度变化，判断修复效果。
Masson染色：术后2，4，8 周取股骨头，冠状切开，10%福尔马林固定1 周、5 %硝酸脱钙3 天，石蜡切片，7 μm厚度，后按说明逐步完成Masson染色。最后光镜下观察坏死股骨头修复情况。
新生血管面积百分比：取实验组织块，连续切片，从第10 张开始选片，每隔50 张选1 张，每个组织选5 张。在每张切片的原冷冻坏死修复区域，随机选取5 个100倍视野，用计算机图像分析系统进行分析，计算各个平面，新生血管占修复区面积的百分比。
新生骨体积百分比：取上述切片，在每张切片的原冷冻坏死修复区域，随机选取5 个100 倍视野，根据Weibel点计数法及立体学公式，VV=∑po/∑pα，以骨组织为参照空间，对各实验组和对照组坏死修复区进行定量，每个视野通过对点的计数来统计修复比例。计算公式中∑po为落在修复区的点数，∑pα为镜下的总点数。
1.4 统计学分析
应用SPSS11.0软件进行统计学分析，数据全部以均数±标准差(±s)表示。各个时间段，3 组间的数据分别进行两两比较，又称多重比较，故使用多样本的单因素方差分析，P<0.05认为有统计学差异。
2 实验结果
2.1 X线检查
术后2 周，关节间隙正常，股骨头外形正常，对照组股骨头内局部可见囊性改变，边缘少量密度增高影。实验组可见斑片样或云絮样密度增高影，且实验1 组密度增高影又多于实验2 组。术后4 周，对照组股骨头局部刚可见云絮样密度增高影，而实验组密度整体呈均匀增高，两实验组间无明显差异。术后8 周实验组股骨头密度增高显著，且两实验组X片无明显差别(图1)，对照组密度增高不如实验组增高明显，且不完全均匀(图2)。
2.2 Masson染色
新生骨小梁呈蓝色，红细胞及成熟骨小梁呈红色，细胞核呈蓝褐色。
术后2 周，对照组可见少量新生血管和细小新生骨小梁。骨小梁蓝染为主，且不均匀，骨陷窝周围蓝染较深，骨小梁局部点缀红染。骨小梁间为纤维结缔组织充填，可见少量新生血管。实验1 组骨小梁染色蓝色为主，但处处可见红染，骨小梁间可见大量活跃的成骨细胞。实验2 组骨小梁染色蓝色为主， 但红染较对照组多，骨小梁间为纤维结缔组织充填，数条血管也见于骨小梁间。
术后4 周，对照组骨小梁较细小且数量少，骨小梁蓝染仍不均匀，局部可见少量红染部分，骨小梁边缘可见少量成骨细胞。实验1 组，骨小梁局部蓝染均匀，出现片状红染，骨小梁边缘骨髓基质干细胞活跃，骨小梁间纤维组织为主，血管丰富，有少量新生骨髓组织。实验2 组骨小梁可见条状蓝染，片状红染，骨小梁间血运丰富，可见新生骨髓组织。
术后 8 周，对照组(图3)骨小梁红染增多，但仍以蓝染为主。骨小梁边缘可见部分静止成骨细胞，小梁间可见丰富骨髓组织。实验1、2 组(图4、5)可见成熟骨小梁，整个骨小梁多数红染，骨小梁排列有序。小梁间可见丰富骨髓组织。两实验组间未见明显差别。
2.3 新生血管面积百分比统计分析
术后2、4、8 周计算机图像采集，并计算不同时期各个冠状切面新生血管占坏死区面积百分比。后行统计学分析。不同时间，各组间两两进行比较，使用单因素方差分析比较差异大小。术后2、4、8 周，实验1、2 组的新生血管面积均明显高于对照组，且均有显著差异(P<0.05)。术后2、4 周，实验1、2 组间比较，新生血管面积也有显著差异(P<0.05)，术后8 周，实验1、2 组间比较，新生血管面积无显著
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