e 23 rabbits were involved in the result analysis. The results of X-ray examination and Masson staining examination showed that the effects of the two experimental groups were better than those of the control group. Alkaline phosphatase activities analysis, statistics of percentage of new vein area and percentage of new bone trabecula all indicated that in the same period of time, the effects of the two experimental groups were better than those of the control group, and the statistical differences were significant. But there were no significant differences between the two experimental groups in all aspects, except the percentage of new vein area after 2 and 4 weeks. Conclusions Bone marrow mononuclear cells composite bone xenograft can restore caput femoris necrosis, and nearly have the same effects as bone marrow stromal cells.
Key words：bone marrow mononuclear cells; bone marrow stromal cells; bone xenograft; caput femoris necrosis
股骨头坏死的治疗仍是国内外的一大难题，对其的研究也是骨科研究中一个活跃的热点。近年来骨组织工程研究快速发展，其在股骨头坏死的治疗方面也有了充分的利用。全骨髓复合载体或者骨髓基质干细胞复合载体[1]等都被应用于股骨头坏死的治疗。但是全骨髓复合载体治疗股骨头坏死疗效不确切。骨髓基质干细胞复合载体，虽然疗效确切，方法却比较烦琐，容易发生污染。我们本次研究的骨髓单个核细胞，是将全骨髓离心，去除其中的血浆和红细胞后，获得的一种混合物质，其中的骨髓基质干细胞比例较全骨髓有很大提高。同时还包括了一些促进修复的因素。通过本次实验中，我们分析骨髓单个核细胞对股骨头坏死的修复作用，同时探讨单个核细胞复合异种骨治疗股骨头坏死的能力。为临床治疗股骨头坏死探索一种新的方法。
1 材料和方法
1.1 材料 实验于2004年9月至2005年1月，在辽宁医学院附属第一医院外科实验室完成。实验动物为新西兰白兔23 只，雌雄不限，由锦州医学院动物实验中心提供，体重2.5～3.0 kg，建立双侧股骨头坏死模型，取其中45 只股骨头用于实验，随机分为3组，分别是对照组，实验1、2 组，每组15 只股骨头，对照组为髓芯减压后单独的异种骨植入，实验1 组为髓芯减压后植入复合骨髓基质干细胞的异种骨，实验2组为髓芯减压后植入复合骨髓单个核细胞的异种骨。
1.2 方法 依照赵宝全的方法[2]。
骨髓基质干细胞的培养及复合载体：参考赵子义等[3]的方法，采用全骨髓培养法分离和培养骨髓基质干细胞。制成细胞悬液，按1∶3 传代。之后仍每3 天换液1 次，待细胞再次长满瓶底，收集骨髓基质干细胞悬液，并离心后，将其配成6×106 个/mL的细胞悬液，无菌条件下，将其逐滴滴至松质骨上，使之充分渗入孔隙,等待植入。
单个核细胞的提取及复合载体：速眠新肌注麻醉实验用兔后，消毒，在股骨大转子、胫骨结节等处用穿刺针及肝素化的注射器抽取骨髓，共8 mL。混合等体积的DMEM培养基后，吹打成细胞悬液，用密度为1.073 g/L Percoll分离液提取单个核细胞，要求将骨髓悬液沿管壁缓慢加入含有提取液的离心管，使悬液置于提取液上层，于离心机1 500 r/min离心20 min，取云雾状中层即骨髓单个核细胞,约1 mL，无菌条件下，将离心所得单个核细胞逐滴滴至松质骨上，使之充分渗入孔隙。等待植入。
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