表明，兔膝关节伸直位固定后4周，关节软骨出现退变表现，8周时退变更明显，与正常组比较有显著性差异，说明造模成功。
3.2 一氧化氮与OA 无机小分子NO是一种生理和病理生理介质[3]，也是一种高反应性细胞毒的自由基，参与各种疾病的组织损伤，由L精氨酸经一氧化氮合酶(NOS)催化生成。目前已经确定的一氧化氮合酶有神经元型(nNOS)、内皮型(eNOS)和诱导型(iNOS)三种，其中eNOS和nNOS因在正常体内存在，各自发挥一定的生理功能，故又称为结构型NOS(cNOS)，活性为Ca2+/钙调蛋白(CaM)依赖性，受细胞内Ca2+浓度的生理调节。iNOS在正常软骨组织中没有表达，但某些细胞因子如白介素1、γ干扰素、肿瘤坏死因子(TNF)和细菌脂多糖(LPS)均能刺激iNOS的表达，一旦iNOS蛋白合成，它的活性是非Ca2+依赖性的，可持续表达，使NO水平升高，并可协同各种细胞因子增加软骨损害[4]。OA发病早期，受损裸露的软骨细胞在周围细胞因子的作用下诱发iNOS蛋白表达，从而导致NO大量释放，进一步促进炎症细胞因子释放，上调基质金属蛋白酶(MMP)的活性和基因表达，抑制胶原的合成，促进胶原的分解[5]，影响软骨的营养交换，最终导致软骨质量不断下降和进行性退化。本实验结果表明，应用iNOS抑制剂氨基胍后，iNOS表达阳性细胞数明显减少，软骨退变进程得到延缓。
3.3 软骨细胞凋亡与OA 关节软骨细胞增殖和凋亡在正常情况下处于动态平衡，保障细胞数量及形态和功能的稳定。应用TUNEL技术证实正常人软骨中未发现或仅见少量凋亡细胞。软骨细胞的异常凋亡可引起关节软骨破坏，导致骨关节疾病。软骨细胞凋亡的途径目前研究认为至少有两种，它们之间相互独立。一种是同滑膜炎症无关的途径，由NO介导;另一种是同滑膜炎症相关的途径，由Fas介导，因为并不是所有的OA都存在滑膜炎症反应，因此NO途径在软骨细胞凋亡中的作用更重要[6]。本实验中，氨基胍组与模型组比较，凋亡细胞数明显减少，但仍高于正常组，可能与仅抑制NO途径，而对Fas途径引发的凋亡无效有关。
3.4 iNOS抑制剂的应用现状 NOS抑制剂可分为两种类型：选择性抑制剂和非选择性抑制剂。后者是对cNOS及iNOS均有抑制作用，如L单甲基精氨酸(LNMMA)，L硝基精氨酸甲酯(LNAME)，L硝基精氨酸(LNNA);前者仅对iNOS具有抑制作用，如AG、L刀豆氨酸(Lcanavanine)、S甲基异硫脲(Smethylisothiourea)、LN6(1亚胺乙基)赖氨酸(LNIL)等。近年来，动物模型实验己显示多种NOS抑制剂能减轻关节软骨缺损和滑膜炎的程度[7]。Pelletier等[8]用LNIL治疗骨性关节炎模型，证实可减少骨刺的发生。形态学观察显示减少股骨髁部和胫骨平台软骨缺损的面积达50%，并且大大减轻软骨缺损和滑膜炎的严重程度，显著降低胶原酶和金属蛋白酶在软骨中的活性以及IL1β、PGE2和NO在滑膜液中的水平。但长期应用非选择性的NOS抑制剂，可干扰NO的正常生理浓度，造成其他系统的病理变化且能使侵袭性关节炎病情恶化。如McCartneyFrancis等[9]报道在骨关节动物模型中长期应用氨基酸类抑制剂，不仅没有改善软骨代谢，反而使侵袭性关节炎病情恶化，就与正常NO代谢干扰有关,因此，特异性iNOS抑制剂更有应用价值。氨基胍是近年研究较多的一种具有相对选择性的iNOS抑制剂，是LNMMA对iNOS的抑制作用的7倍[10]，并且是持续抑制 [11]。其选择性主要通过三种机制实现。①AG与iNOS的结合能力较cNOS约强50-500倍;②AG和精氨酸与iNOS催化位点的结合能力相似，但精氨酸与cNOS催化位点的结合能力较AG约强1000倍。在生理情况下，精氨酸即存在于细胞内，因而能保护cNOS不被AG抑制;③AG只有在NOS激活产物存在的情况下才产生抑制作用。iNOS一旦被激活，便能持续产生代谢产物，而细胞内的cNOS在生理情况下是没有活性的，只有当特定刺激物使细胞内游离钙一过性增高时才能被短暂激活，在这种情况下，AG无法对cNOS产生持续的抑制效应。与非选择性NOS抑制剂比较，AG在抑制iNOS病理性表达的同时，很大程度上保留了cNOS的生理功能。
【参考文献】
[1]Okazaki R, Sakai A, Ootsuyama A, et al. Apoptosis and p53 expression chondrocytes relate to degeneration in articular cartilage of immobilized k
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