氨基胍对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

　　图1 不同组兔关节软骨HE染色(略)

　　Fig.1 HE staining of rabbit arthrodial cartilage in different groups (×100)

　　A: normal group; B: model group, 8 weeks; C: aminoguanidine group, 8 weeks

　　2.3 凋亡阳性细胞计量分析 凋亡阳性细胞为散在分布，胞核或胞核和胞质同时呈棕黄色，凋亡阴性细胞胞核呈蓝色。正常组仅在关节软骨的深层有少量的凋亡阳性细胞散在分布;氨基胍组和模型组凋亡阳性细胞增多，分布于各层(图2)。4周时凋亡阳性细胞数正常组为(4.00±2.58)%,模型组为(21.83±3.06)%，氨基胍组为(15.83±3.76)%，正常组显著低于氨基胍组和模型组(P<0.05)，而且氨基胍组低于模型组(P<0.05)。8周时凋亡阳性细胞数正常组(5.75±1.71)%显著低于氨基胍组(16.83±3.06)%和模型组(43.17±6.65)%(P<0.05)，且氨基胍组低于模型组(P<0.05)。凋亡阳性细胞数氨基胍组4周与8周无显著性差异(P>0.05)，而模型组有显著性差异(P<0.05)。

　　2.4 iNOS表达阳性细胞计量分析 iNOS表达阳性细胞胞质呈均匀红染颗粒，胞核蓝染，胞膜完整。正常组在关节软骨的表层有少量的iNOS阳性表达，模型组iNOS表达增多，主要在表层和中层;氨基胍组iNOS表达增多不明显。4周时iNOS表达阳性细胞数正常组为(4.00±1.83)%,模型组为(13.55±3.51)%，氨基胍组为(6.33±2.58)%，方差分析表明正常组与氨基胍组间iNOS表达阳性率无显著性差异(P>0.05)，正常组、氨基胍组均与模型组间有显著性差异(P<0.05)。8周时iNOS表达阳性细胞数正常组[(3.75±1.71)%]与氨基胍组[(8.50±3.51)%]无显著性差异(P>0.05)，正常组、氨基胍组均与模型组[(41.33±8.33)%]间有显著性差异(P<0.05)。iNOS表达阳性率氨基胍组4周与8周无显著性差异(P>0.05)，模型组有显著性差异(P<0.05)。

　　图2 TUNEL法检测不同组兔关节软骨细胞凋亡(略)

　　Fig.2 Apoptosis of rabbit arthrodial cartilage cells by TUNEL in different groups (×100)

　　A: normal group; B: model group, 8 weeks; C: aminoguanidine gruop, 8 weeks

　　图3 不同组兔关节软骨免疫组化染色(略)

　　Fig.3 Immunohistochemical staining of rabbit arthrodial cartilage in different groups (×100)

　　A: normal group; B: aminoguanidine group, 8 weeks; C: model group, 8 weeks

　　3 讨论

　　3.1 OA动物模型 从制作方法上分为诱发模型和自发模型，前者通过各种操作如关节制动、手术、关节内注射物质等诱导OA产生;后者不用任何外界干预，动物自发产生OA，如C57黑鼠、STR/ort小鼠等。关节固定法简单易行，成功率高，无手术创伤性滑膜炎的干扰，适于研究药物疗效及药物对关节软骨成分、炎症介质、蛋白酶等表达的影响和治疗药物的筛选。Okazaki等[1]实验研究表明，家兔膝关节伸直位制动7-14d后，关节软骨即出现早期退变，28d后出现关节软骨中度退变，42d后则出现严重的退变，国内彭丹等[2]用长腿石膏管型固定家兔膝关节于过伸位，对其关节软骨细胞进行形态学及原位DNA断裂标记研究。发现制动1周时即出现软骨表层细胞凋亡，2周后凋亡呈增加趋势，6周时出现全层软骨细胞大量凋亡，而正常及实验对照组很少出现凋亡细胞，提示制动一段时间可以造成OA。本实验选用关节外固定法观察药物对关节软骨退变的影响，结果

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