e longer time. The expression of BMP2 in model group was extremely lower than that in control group at the 2nd week. In 4th and 8th week, there was no expression of the BMP2 in model group. Conclusion The typical animal model of osteonecrosis is induced by the modified method of horse serum plus methylprednisolone. Inside the femoral head of steroidinduced osteonecrosis in rabbits, the expression of the PPARγ is upgraded; the expression of the BMP2 is inhibited.
KEY WORDS: femoral head necrosis; peroxisome proliferatoractived receptorgamma; bone morphogenetic protein2; animal model; immunohistochemsitry
股骨头缺血性坏死是临床常见的难治性疾病之一，其发病原因众多，发病机理尚不明确。该病临床上分为创伤性与非创伤性两大类，其中激素性股骨头坏死在非创伤性股骨头坏死中发病率居首位，并呈逐年增高的趋势。针对激素性股骨头坏死的原因学研究，国内外学者提出了多种假说，但迄今尚无一种学说可以完全解释其发病机理。建立激素性股骨头坏死动物模型时间长、成本大、成功率低、动物死亡率高，因此对造模方法的研究仍将是长期面临的一项课题。在本研究中我们通过对已有造模方法进行改进，试图寻找一种新的效率更高的造模方法，并在此基础上对激素性股骨头坏死的发病机理进行了进一步的探讨。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康成年新西兰白兔35只(西安交通大学实验动物中心)，雌雄各半，体重2.6-3.2kg，平均2.9kg。颗粒饲料喂养，单笼饲养。
1.2 主要仪器与试剂 Rabbit AntiPPARγ、Rabbit AntiBMP2、羊抗兔二抗(博士德生物工程有限公司);兔SP检测试剂盒(SP9001，中杉金桥);马血清(北京元亨圣马生物技术研究所)，甲强龙(美国辉瑞生物制药公司);多聚赖氨酸、多聚甲醛(博士德生物有限公司);二甲苯、无水乙醇、乙二胺四乙酸二钠(天津市化学试剂六厂)。柯达计算机X线摄影成像系统/CR;RM2135石蜡切片机(德国Leica 公司);数显恒温水浴锅HH2(国华电器有限公司);2022AB电热恒温干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司);显微镜(Motic);W550CW型图像信号采集与分析系统(德国Leica公司)。
1.3 方法
1.3.1 动物模型制作及分组 动物适应性喂养1周后，精确称重，随机分为正常对照组(15只)和模型组(20只)。两组动物在体重及雌雄数等方面经t检验差别无统计学意义。首次应用马血清10mL/kg，经兔耳缘静脉注射，间隔3周后，马血清减量为6mL/kg经兔耳缘静脉再次注射;间隔2周后，腹腔注射甲基强的松龙，按45mg/kg连续3d，每天注射1次。注射激素期间，每天每只动物腹腔注射青霉素10万单位，连续7d，预防感染。正常对照组动物常规饲养。
1.3.2 X线检查 于最后1次激素注射后，4周末，两组各取4只动物，氯胺酮复合麻醉(安定3.5mg/kg肌注15min后，氯胺酮25mg/kg肌注)后，拍双髋正位X线片。
1.3.3 病理组织学检查 于最后1次激素注射后2、4、8周末，两组随机各取4只动物，氯胺酮复合麻醉(同1.3.2)后，备皮、消毒、固定动物。严格无菌手术下，取出双侧股骨头，沿冠状面剖开，冷PBS冲洗后，将所取标本置于10%(体积分数)中性甲醛溶液(0.1mol/L, pH=7.4)固定3d，然后置于10%(体积分数)EDTATris缓冲液中脱钙, 每周更换脱钙液1次，观察骨标本表面颜色并用物理法测定其脱钙程度。脱钙完全后取材，逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片行HE染色。光镜观察骨组织、骨髓组织、骨小梁及髓内脂肪组织的变化。
1.3.4 免疫组化染色 如上法制备石蜡切片，常规免疫组化染色。其中PPARγ和
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