n was better than 3 other groups. There was no significant difference in Mankin scale between control group and model group(P>0.05), and between these 2 groups the electro microscopic observation was similar. Conclusion Intraarticular injection of ligustrazine can alleviate degeneration and promote selfreparation of articular cartilage. Method of intraarticular injection of cortisocteroid has no reparation effect on OA cartilage degeneration.
KEY WORDS: osteoarthritis; ligustrazine; intraarticular injection
骨性关节炎(osteoarthritis, OA)是一种严重影响患者生活质量和工作的常见病、多发病,系关节软骨的退变和继发性骨质增生所致的一种慢性骨关节病。膝关节OA发病率最高。由于其病因病理尚不完全清楚,因此,OA治疗成为临床治疗的难题之一。近年来,陆续有采用中药关节腔注射治疗膝骨关节炎的报道,而许多基础研究也表明川芎嗪有很好的防治关节软骨退变的作用,有望成为治疗骨关节炎的有效方法之一。
1 材料与方法
1.1 材料 实验动物:健康成熟新西兰大白兔26只,体质量2.5-3.0kg,雌雄不限,由西安交通大学实验动物中心提供。实验仪器:日本日立H600透射式电子显微镜,LKBV型超薄切片机,奥林巴斯光学显微镜。
1.2 方法 26只动物随机分为4组,正常组2只动物(观察双侧后肢正常关节软骨),其余3组为模型组、实验组及对照组,每组各8只动物。采用膝关节制动建立模型的方法[1]建立骨关节炎模型。将3组动物右膝关节用长腿管型石膏固定于完全伸直位,关节制动。正常组动物不予任何处理,正常喂养,观察软骨正常形态。模型组仅行关节固定,不作其他处理,评价造模方法,并与实验组、对照组比较。实验组和对照组所固定的膝关节前部石膏开窗作为关节腔注药部位。骨关节炎模型建立后,实验组关节腔注射川芎嗪0.3mL,每周一次;对照组关节腔注射地塞米松0.3mL,每周一次。在6周时,分别取各组半数动物,采用空气栓塞法处死,打开关节腔进行大体标本观察,去股骨内、外髁全层软骨进行光镜和透射电镜观察。9周时,分别处死各组剩余的半数动物,以同样的方法进行处理观察。
大体标本观察:按软骨损伤分级法将软骨退变程度分为:0级正常;Ⅰ级关节软骨变为黄白色,光泽差,表面仍较平滑;Ⅱ级在Ⅰ级的基础上出现溃疡改变,溃疡未及全层;Ⅲ级软骨全层破坏,软骨下骨暴露。
将取出的股骨髁软骨标本行常规固定,脱钙,石蜡包埋,切片,HE染色,在光学显微镜(OM)下观察。依据改良Mankin法中的结构、细胞以及潮线的完整性进行OA评分。
电镜(EM)观察:软骨组织样品取出后,固定48h,脱钙2周,乙醇梯度脱水,乙醇醋酸双氧铀块染2h或过夜;环氧树脂Epon812浸透、包埋,聚合后作半超薄切片(1-2μm),美兰染色后光学显微镜下定位,超薄切片(50-70nm),醋酸铀、柠檬酸铅染色后,透射式电子显微镜下进行超微结构观察并拍照。
1.3 统计学处理 实验数据以均数±标准差(±s)表示,两组间比较用t检验,以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 大体标本观察 4组动物膝关节腔均无感染。各组软骨组织损伤分级见表1。
表1 各组软骨组织损伤分级(略)
Table 1 The grades of cartilage tissue injury in each group
2.2 普通光学显微镜观察 正常组:软骨表面光滑,软骨细胞排列规则,层次清楚,潮线完整;基质染色均匀(图1a)。模型组:软骨表面裂隙明显,局部有缺损,软骨细胞排列紊乱,软骨细胞减少,并见灶性溶解、坏死;潮线多数消失,血管自软骨下骨长入软骨钙化层。软骨厚度变薄,基质异染性增强(图1b)。实验组:软骨表面局部有滑膜被覆,纤维组织轻度增生,软骨细胞增生、肥大,排列稍紊乱,潮线
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