P荧光较弱，其转染率分别为(1.2 ± 0.4)%、(4.3 ± 1.4)%。rAAV2-EGFP各组细胞均有表达EGFP，并且随MOI增加，其表达量及表达荧光强度均增强，rAAV2-EGFP(MOI = 5 × 105)组转染率已达(20.3 ± 2.4)%，明显高于rAAV1-EGFP(MOI = 5 × 105)组(P < 0.01)。转染7 d后，各组细胞均表达EGFP，其中rAAV1-EGFP(MOI = 2 × 104)组及rAAV1-EGFP(MOI = 1 × 105)组表达量仍然很低，而rAAV1-EGFP(MOI = 5 × 105)组其转染率达到了(11.8 ± 2.2)%;而rAAV2-EGFP各组细胞此时表达EGFP量明显增加，随MOI增加其转染率分别为(20.1 ± 3.1)%、(43.8 ± 3.4)%、(64.0 ± 5.6)%，明显高于相应MOI的 rAAV1各组细胞(P皆 < 0.05;图4)。连续观察发现随着时间延长，各组EGFP阳性细胞逐渐增多，荧光亮度增强，但增速较慢。到21 d后，表达EGFP荧光的细胞数量及亮度不再有明显变化。各组rAAV-EGFP转染MSC的转染率见表1。
2.5 细胞毒性实验
转染3 d及7 d后各组细胞与对照组相比，各组D(490 nm)值差异无统计学意义(P = 0.371，P = 0.471，表2)。
3 讨 论
3.1 MSC的鉴定
目前没有一个特征性的分子能特异性地对MSC进行鉴定。比较一致的标准是：①形态学鉴定，MSC呈梭形外观，贴壁生长;②选取有代表性的、尤其区别容易混杂细胞的表型分子抗体做流式细胞术表型鉴定，结果符合MSC特征;③ MSC具有体外诱导分化为已知细胞的能力。
研究结果显示，MSC光镜下形态和Giemsa染色均与成纤维细胞相似，主要为梭形。然而超微结构显示MSC细胞核/浆比例大，显示了干细胞的幼稚特性，与成纤维细胞和血细胞等明显不同。而MSC的这种低分化状态构成了其强大的自我复制和能够向多种组织分化的基础。
鉴定MSC表型的表面标志很多，一般认为MSC表达SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD92、D106、CD120a、CD124和CD166等表面蛋白[7-8]，而不表达CD34、CD38、CD45、CD11a和CD14等。实验结果表明，CD44的阳性表达为97.89%，CD29阳性表达为95.63%，而CD34仅为0.41%。因此，可以认为所获得的细胞是较为均一的的MSC。
3.2 不同血清型AAV对MSC的作用
AAV载体是最近发展起来的一类新型基因载体，作为病毒载体的重要一员，与其他病毒载体相比，具备如下特性：人群感染率高(80% ～ 90%)，但无致病性，且免疫反应轻微;可定点整合，并能以较稳定的形式存在;宿主范围广泛，包括分裂期和非分裂期的多种细胞;携带的外源基因长期持续稳定表达，并可调控;具有较好的热稳定性和抗酸碱性以及抗有机溶剂处理的特点，便于储存[9-10]。因而其在基因治疗中的应用潜力引起了人们极大兴趣。
AAV 属细小病毒科家族成员，其颗粒直径18 ～ 26 nm，结构简单无包膜，仅由核衣壳和一条单链DNA构成。国际病毒分类委员会根据衣壳的差异己鉴别出多个AAV种类成员，包括AAV 1 ～ AAV-11等[11-12]。不同AAV血清型具有不同的衣壳构象，因而其识别与结合的细胞表面受体或共受体也相应有差异[13]。
形态结构的差异和细胞趋向性的不同导致不同血清型转染的细胞类型和感染效率也各不相同。AAV-1和AAV-7在骨骼肌中的转染效率较高[14-15]，AAV-3在巨核细胞的转染具有优势[16]，AAV-5和AAV-6感染气道顶侧细胞更加高效[4-5]，AAV-8可将基因高效地靶向传递至骨骼肌和心肌[6]，AAV-2、AAV-4和AAV-5均可转导中枢神经系统的细胞，但在感染途径和靶细胞类型上存在差异[17]。
AAV对不同动物MSC的转染效率也不同。McMahon等[18]证实AAV对大鼠MSC转染率极低，即使增加病毒滴度也不会增强转染效率;而对兔MSC则有较高的转染率。Chng等[19]对狒狒及人MSC研究发现，AAV对狒狒的转染率明显较人的高，不同血清型的AAV对同种MSC的转染效率也不一样：AAV2 > AAV5 > AAV3 > AAV1、 AAV4、 AAV6、AAV8。McMahon[18]等通过五种不同血清型AAV1 ～ AAV5
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