primary and passage cultures. It showed that the ratio of cellular nucleus and cytoplasm was high and chromatin was loosened with TEM. Flow cytometry analysis indicated that MSC were universally positive for CD29 and CD44， but negative for CD34. With the increase of MOI and the extension of time， the transfection efficiency of rAAV2-EGFP enhanced， which was higher than that of rAAV1-EGFP into MSC (P < 0.01). After transfection， the growth of MSC was normal. MTT detection showed that there was no significant difference of the value of OD in MSC between transgenic and no transgenic group(P > 0.05). 【Conclusion】 rAAV2 is a better vector of gene transfection intocanine MSC than that of rAAV1. rAAV2 has no inhibition effect on the MSC’s growth， therefore， it is a safe and feasible vector for the seed cells of tissue engineering.
Key words： mesenchymal stem cells; adeno-associated virus; enhanced green fluorescent protein; tissue engineering; cainine
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells， MSC)具有多向分化的潜能，可将其在体外培养、增殖、诱导后分化为成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、心肌细胞等，是目前组织工程的种子细胞之一[1-3]。腺相关病毒(adeno-associated virus， AAV)载体是目前已知的可以整合在染色体上长期表达而不致病的病毒载体，但AAV载体对不同的细胞转染效率存在差异;而且对于同一种细胞，不同血清型的AAV载体转染效率也不尽相同[4-6]。目前，AAV载体对MSC的转染情况少有报道，对于不同血清型AAV载体对犬MSC的转染效率的比较则未见报道。为明确AAV1与AAV2载体对MSC的转染特点和表达效率，我们就AAV载体介导的报告基因增强绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein， EGFP)对体外培养犬MSC的转染情况进行了观察。
1 材料和方法
1.1 犬MSC的分离培养与鉴定
1.1.1 犬MSC的分离和培养
30 g/L戊巴比妥钠静脉麻醉后骨穿针行髂后上棘穿刺，抽取骨髓组织约5 mL，1 000 r/min(r = 15 cm)离心7 min，去脂肪及上清液，l-DMEM重悬细胞，沿管壁缓慢滴加底部有等量Percoll(1.073 g/mL)分离液的离心管中，2 000 r/min(r = 15 cm)离心15 min，吸取中间界面白膜层，用L-DMEM洗涤，1 200 r/min(r = 15 cm)离心5 min，弃上清，重复1次，加入l-DMEM完全培养基(含体积分数10% FBS，青霉素钠100 U/mL、链霉素100 U/mL)，以4 × 104 /cm2接种于T-25培养瓶，置于37 ℃、体积分数5% CO2和饱和湿度的孵箱内培养。48 h后换液，去除未贴壁细胞，以后每3 d换液一次。相差显微镜观察照相细胞形态和生长情况，待细胞达到80% ～ 90%融合时，用2.5 g/L胰酶(含0.2 g/L EDTA)消化传代培养。
1.1.2 Giemsa染色观察细胞形态
将第3代细胞MSC于内置有消毒盖玻片的六孔板内制备细胞爬片。用甲醇与冰醋酸(体积比3：1)固定5 min，干燥后加Giemsa染液染色15 mim，冲洗、干燥，中
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