图有差异的肽段离子进行MS/MS分析。所有实验样品的质谱图均用默认模式获得。利用软件Mascot distiller过滤基线峰、识别信号峰。利用Matrixscience公司的Mascot软件搜索NCBInr数据库(http：//www.matrixscience.com)，寻找匹配的相关蛋白质，同时查询其功能，来明确鉴定的蛋白质为何种蛋白质。
1.3 统计学方法
正态分布计量资料采用均数 ± 标准差描述。电泳图分析利用ImageMaster 2D Elite 5.0分析软件对图像进行强度效正、点检测、背景消减、匹配。所有数据的统计分析在SPSS 15.0软件上进行。
2 结 果
2.1 差异表达蛋白查找
在实验组与对照组中蛋白点数量分别为(950 ± 50)和(920 ± 50)。大部分点均集中在分子质量10到120 ku及等电点I4到7之间。各双向电泳图蛋白分布样式相似，匹配性好。在所用的膝关节OA病例组出线的上调或下调大于3倍的蛋白点共7个，如图1及表1所示。
2.2 差异表达蛋白鉴定结果
经过质谱鉴定，7个差异表达蛋白的可能身份如表2所示。如蛋白点具有越高的分数(≥58认为差异显著)，结果的可靠性则更高。
3 讨 论
OA的致病可能有多种因素参与，目前的研究表明OA的致病是多种生化因素参与的复杂的网络状的病理变化过程，本研究不拘束于任何一种致病假说，通过蛋白组学的方法以希望发现参与其致病机制中的重要的蛋白质成分。
对氧磷酶1(PON1)具有水解对氧磷， 即磷酸二乙基对硝基苯基酯(paraoxon)的作用。已有研究表明，在肝细胞系HepG2中加入氧化的低密度脂蛋白，氧化的脂质体，白细胞介素(interleukin，IL)IL-1β，肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)中的任一种进行孵育，均能降低PON1基因的表达[5]。而IL-1β、TNF-α均在关节的炎症反应中起重要作用[6]，在类风湿性关节炎的患者的血清中，PON1的活性也明显下降[7]。就目前所查及的资料而言，PON1的活性在氧化压力(oxidative stress)升高的情况下均下降[8]。另一方面，氧化压力能导致软骨细胞内端粒的不稳定，使软骨细胞合成粘多糖的功能下降[9]，在OA的致病和进展中起重要的作用。本研究中PON1在OA患者中的表达下调可能与关节的炎症及氧化压力升高有关。
对氧磷酶3(PON3) 具有与PON1的类似抗氧化特性，Draganov的研究发现，兔子的PON3纯化血清可以抑制体外的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)的铜介导氧化[10]。本实验结果显示OA患者血清PON1、PON3表达下降，这种现象说明三种可能：①在OA病程中，可能存在以上两种蛋白的过度消耗;②以上两种蛋白的表达下调，导致OA关节微环境中氧化压力的升高，从而加速OA的致病和进展;③以上2种蛋白表达下调与OA没有直接联系。要阐明OA与PON1、PON3的确切联系，尚需进一步研究。
α-1-微球蛋白/bikunin前体蛋白(AMBP)是α-1-微球蛋白及bikunin(即 Inter-alpha-trypsin inhibitor light chain (ITI-LC))的蛋白前体。可抑制多种丝氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、粒细胞弹性蛋白酶和纤溶酶等; 还可通过抑制脂多糖诱导的细胞因子合成发挥抗炎作用[11]。在OA病变过程中，软骨细胞外基质的合成与分解失去平衡，基本结构遭到破坏，其中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的破坏最为显著。所以，本实验发现OA患者血清AMBP的低表达有可能与OA致病机制中的炎症反应有密切的关系。
人类载脂蛋白M(APOM)最初于1999年由Xu和Dahlb?覿ck在乳糜颗粒中分离出来[12]。通过免疫组化染色及原位APOM的mRNA杂交的方法均说明APOM由肝实质细胞肾小管上皮细胞分泌。因为APOM基因位于6号染色体组织相容性复合体III区域[13]，大多数在该区域的基因均与免疫反应有关。APOM基因位点与TNF-α和淋巴细胞毒素基因位点非常接近[12]，因此APOM可能与免疫系统相关，或者受一些细胞因子和炎性因子调控。目前，已有学者提出APOM具有抗炎功能的假说[14]。Kenneth[15]的研究发现，在感染和炎症反应中，APOM表达减少，与本研究中OA患者APOM表达下调的结果相类似。
免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig
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