淫羊藿总黄酮对金属离子刺激单核细胞分泌肿瘤坏死因子的影响

　　Key words： total flavones of Epimedium; bisphosphonate; metal ion; osteolysis; prosthesis failure

　　人工关节置换目前已广泛应用于临床。人工关节磨损颗粒能刺激巨噬细胞/单核细胞产生大量溶骨性因子，包括肿肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)，白细胞介素-6(IL-6)等,这些溶骨性因子能刺激破骨细胞产生骨溶解,最终导致人工关节无菌性松动[1-3]。文献报道淫羊藿总黄酮(total flavones of Epimedium， TFE)可以抑制TNF-α的基因表达,从而达到抗骨质疏松的作用[4]。本实验通过体外实验将单核细胞、金属离子、二膦酸盐类药物帕米膦酸钠、TFE共同培养,观察TFE对金属离子诱导的溶骨性因子TNF-α释放的影响。

　　1 资料和方法

　　1.1 样本采集 36例健康献血者。男18例,女18例,年龄39～68岁,平均52.8岁。每例采集外周血10 ml肝素抗凝。

　　1.2 试剂和器材 TFE(沈阳药科大学),帕米膦酸钠(南京正大天晴制药有限公司), CoCl2粉末(南康化学仪器公司),RPMI-1640培养基(丹麦GIBCO公司),6孔细胞培养板(Corning公司),胎牛血清(杭州四季青公司), TNF-α放射免疫试剂盒(北京东亚免疫技术研究所),二氧化碳培养箱(美国Forma Scientific公司)。

　　1.3 方法及分组 无菌采集外周血以Hank液稀释1倍,分层液梯度离心法分离出单核细胞。洗涤3次,加含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液制成细胞悬液,细胞计数,调整细胞数至4×108/L,锥虫蓝排除法检测细胞活力均大于95%。6孔培养板中滴加细胞悬液,每孔加3 ml，置37℃、5% CO2恒温恒湿培养箱培养4 h,使细胞贴壁,洗去非贴壁细胞,留下单核细胞。每板第1孔内加入含10%的胎牛血清的RPMI 1640培养液3 ml，其余5孔加入终末浓度为10 mg/L CoCl2溶液3 ml，并于第3孔加入帕米膦酸钠使其浓度为10 mg/L,于第4、5、6孔加入TFE使其浓度分别为5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L。即第1孔为仅有单核细胞的对照组(A组),第2孔为单核细胞+金属离子组(B组),第3孔为单核细胞+金属离子+帕米膦酸钠10 mg/L(C组),第4孔为单核细胞+金属离子+TFE 5 mg/L(D组)，第5孔为单核细胞+金属离子+TFE 10 mg/L(E组)，第6孔为单核细胞+金属离子+TFE 20 mg/L(F组)。各组同条件培养48 h,取上清液,测定上清液中的TNF-α含量。

　　1.4 统计学处理 数据以±s表示,采用SSPS 13. 0软件包行方差分析和q检验。P<0.05为差异有显著性。

　　2 结 果

　　6种不同处理组上清液中TNF-α含量的比较见表1。方差分析显示,6组细胞上清液中TNF-α含量差异有显著性(F=3495, P<0.01)。两两比较显示,B组TNF-α含量明显高于A组(P<0.01),表明金属离子可以刺激单核细胞使TNF-α的分泌量增加;C、D、E、F组TNF-α含量分别明显低于B组(P<0.01), D、E组TNF-α含量分别与C组之间的差异无显著性(P>0.05),表明帕米膦酸钠和TFE均能降低TNF-α的分泌量; D、E、F组两两之间TNF-α含量差异均有显著性(P<0.05),表明随着TFE浓度的增加,对TNF-α分泌量的抑制作用增强。表1 各组细胞上清液中TNF-α含量的比较

　　3 讨 论

上一页  [1] [2] [3] [4] 下一页