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运用原位末端标记技术检测大鼠缺氧缺血性脑损伤中III型细胞死亡 |
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9)37℃干燥箱内干燥切片；(10) 每张切片滴加40 μl TUNEL(经末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记)反应液，置37℃水槽内60 min；(11)滴加甘油(1∶9 0.05 mol/L Tris稀释)封片，荧光显微镜观察1～3 h；(12)0.05 mol/L pH 值7.6 的TBS(Tris 缓冲盐溶液)漂洗去盖片，冲洗漂洗各3次，每次3 min；(13)每张切片滴加Converter POD(辣根过氧化物酶) (3∶1 0.05 mol/L Tris 稀释)40～60 μl，置37℃水槽内60 min；(14) 0.05 mol/L pH 7.6 的TBS冲洗漂洗各3次，每次3 min；(15)二氨基联苯胺(DAB)显色5～15 min，镜下控制；(16)双蒸水终止反应；(17)苏木素复染细胞核1 min，切片脱水，中性树胶封片。阴性对照，在实验流程10不加TUNEL反应液，于实验流程16后，光镜下无阳性信号出现。
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