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PL与巨核细胞增殖分化、血小板生成密切相关［1］。我们检测了AITP患儿治疗前后TPO水平的动态变化及c-MPL mRNA转录水平，以探讨其在ITP发病中的意义。
对象和方法
一、对象
AITP患儿13例，均为初治病例，年龄2～14岁,均符合文献所报道的诊断标准［2］。采用大剂量甲基强的松龙(每日20～30 mg/kg)冲击治疗5 d后，改为泼尼松(每日1～1.5 mg/kg)口服。分别于治疗前、治疗后第5 及第10天抽取外周静脉血进行检测；正常对照20例为2～14岁的健康儿童。
二、方法
1.血清TPO水平检测：采用ELISA法。TPO检测试剂盒由美国 Systems Inc公司生产，检测方法参照试剂盒说明书，其单位为pg/ml。
2. 外周血血小板c-MPL mRNA水平检测：采用半定量RT-PCR法。美国Biotecs laboratories Inc公司Ultraspec RNA提取试剂盒，用于扩增受体c-MPL cDNA引物，由美国Emory University Microchemical Facility合成，序列为：上游5′-TGGAGATGCAGTGG-CACTTG-3′；下游3′-TGATGTCTGGGGTGTCAAGA-3′，扩增产物为187 bp。
采用经典的PCR产物定量标准β-actin作为内参照［3］，β-actinc DNA的引物序列为上游5′-GTGGGG-CGCCCCAGGCACCA-3′；下游5′-GTCCTTAATGTCAC-GCACGATTTC-3′，扩增产物为530 bp。因为血小板内的β-actin相对稳定，故在同一反应体系中加入两对引物，用凝胶成像分析系统对PCR产物进行分析，比较同一泳道两条产物（c-MPL与β-actin）之间的密度强弱，即以每份样品中c-MPL mRNA相对于β-actin的量（c-MPL mRNA/β-actin）作为定量标准。
3.血小板表面血小板相关抗体IgG(platelet-associated immunoglobulin G ,PAIgG)检测：采用ABC-ELISA法，其单位为ng/107 PLT(每107的血小板含多少ng)。
三、统计学方法
采用配对资料t检验、随机区组F检验和直线相关分析。
结果
一、AITP患儿糖皮质激素治疗前后血清TPO和血小板表面PAIgG水平
表1显示，AITP患儿治疗前与正常对照组比较血清TPO增高，差异有显著性(P<0.05)；治疗后第5天，当血小板数明显增高时，TPO下降，与正常对照组比较，差异无显著性(P>0.05);治疗后第10天，血小板数有所下降时，TPO水平又增高，与正常对照组比较，差异有显著性(P<0.05)。
表1 AITP治疗前后PLT、PAIgG和
血清TPO水平的变化(±s)
组别 例数 PLT
(×109/L) PAIgG
(ng/107 PLT) TPO
(ng/L)
正常对照组 20 192±54
37±21
62±23
AITP组
治疗前 13 40±20 453±133 82±23*
治疗后
第5天 13 184±109 124±66 60±26**
第10天 10 133±62 73±41 94±44△
注：* AITP治疗前与正常对照组的均数t检验，t=2.25, P<0.05;
**AITP治疗前与治疗后第5天配对比较，t=2.01，P>0.05；△ AITP治疗后第10天与治疗前均数t检验，t=2.68 P<0.05
二、AITP患儿血小板c-MPL mRNA水平
通过凝胶成像分析系统对8例ITP患儿治疗前后血小板PCR产物进行分析，结果上一页 [1] [2] [3] 下一页
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