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用免疫荧光方法检测鼻咽分泌物中多种呼吸道病毒抗原 |
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00 children with lower respiratory tract infections collected at Beijing Children′s Hospital during the 1994-1995 winter season were also examined with the IFA.Results The sensitivity of the Chemicon assay versus virus isolation was 95% and specificity 86%. A viral etiology was identified in 105/280 (38%) Chinese children whose samples were evaluable (influenza A 20%, RSV 14%, adenovirus 3% and parainfluenza 1,2,3,7%).Conclusion The Chemicon IFA was shown to be an excellent tool for identification of viral respiratory tract infections although there was a problem with the the screening assay where around 4%-8% of samples had non-specific staining, necessitating verification test.
【Key words】 Fluoroimmunoassay Respiratory syncytial viruses Antibodies, monoclonal Antigens, viral
呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、副流感病毒1、2及3型和腺病毒是下呼吸道感染的常见病原［1-3］。快速诊断呼吸道病毒感染对于指导治疗、避免不必要的抗生素使用及采取必要的隔离措施都有重要意义［4］。免疫荧光技术检测临床标本中的病毒抗原已有20多年历史，是快速、有效而廉价的方法［5，6］。虽然病毒分离仍为“黄金”方法，但由于不同病毒需要不同的培养细胞很难在普通试验室作为常规使用［7］。聚合酶链反应可能比免疫荧光方法更为敏感，但价格贵，对RNA病毒需要进行逆转录。Chemicon呼吸道病毒诊断试剂可以同时在一孔细胞涂片上进行7种病毒抗原筛查。如筛查为阳性则再用单一病毒特异的单克隆抗体进行确定试验。可减少对阴性标本的不必要的单一病毒抗原的检测，同时又不致遗漏常见的呼吸道病毒。
材料与方法
一、临床标本
1.标本采集时间为1995年2月14日～1995年3月6日，急性下呼吸道感染患儿82例的鼻咽分泌物及14例支气管肺泡灌洗液细胞涂片，标本取自瑞典Karolinska医院病毒室。
2.北京儿童医院的300例急性下呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物标本。其中83例为门诊患儿，217例为住院患儿，年龄为2个月～14岁，标本采集时间为1994年11月～1995年2月。
二、标本采集
将塑料导管经鼻腔插入7～8 cm，达到咽部后轻轻吸取鼻咽分泌物，然后用2 ml消毒生理盐水冲管，标本立即送实验室。
三、细胞涂片制备
用吸管吹打粘液后，1 000 r/min离心10分钟，上清液用于病毒分离，沉淀物用10 ml PBS洗涤，再用少量PBS悬浮，然后点于多孔涂片上，每片涂6～12孔，空气干燥后用冷丙酮固定10分钟，-20℃保存。
四、病毒分离
分离流感病毒、副流感病毒及呼吸道合胞病毒(RSV)，使用马丁-达比狗肾(MDCK)及Ma-104细胞进行培养，总时间为3周。对7天未见细胞病变的MDCK细胞及14天未见病变的Ma-104细胞进行血液吸附试验。对有细胞病变或血液吸附试验阳性的标本再通过直接免疫荧光方法鉴定。
五、Chemicon免疫荧光检测
用Chemicon试剂(Chemicon International Inc, Temecula, CA, USA)对所有标本进行间接免疫荧光检测。筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体，即甲型及乙型流感病毒、RSV、副流感病毒1、2、3型及腺病毒单克隆抗体。当筛查试验为阳性时，再用单一特异性单克隆抗体对新鲜标本孔进行检测。10～20 μl混合单克隆抗体或单一单克隆抗体置于标本上，在37℃上一页 [1] [2] [3] 下一页
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