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肺炎链球菌对抗生素耐药性的研究 |
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d.
【Key words】 Streptococcus pneumoniae Drug resistance， microbial Antibiotics
肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae， Sp)是人类呼吸道感染的主要致病菌，也是儿科最常见的病原菌。本研究用标准药敏试验方法——琼脂稀释法检测了80年代中期49株和90年代中期33株Sp对12种抗生素的敏感水平，比较其耐药性变化。
材料与方法
一、菌株来源
1．80年代中期Sp：购自中国药品生物制品检定所菌种室，为1983～1985年Sp，共49株，其中8株(16%)来自血液，17株(35%)来自脑脊液，24株(49%)来自中耳引流液。
2．90年代中期Sp：北京儿童医院1995～1997年就诊化脓性中耳炎患儿及住院肺炎、脑膜炎患儿临床标本分离所得，共33株。19株(58%)来自肺炎患儿咽分泌物，3株(9%)来自脑膜炎患儿的脑脊液，11株(33%)来自中耳炎患儿中耳引流液。
3．标准菌株ATCC49619：美国疾病控制中心赠送。
二、抗生素标准品
包括青霉素、头孢呋新、头孢噻肟、亚胺培南、红霉素、克拉霉素、氯林可霉素、四环素、复方新诺明、氯霉素、利福平和万古霉素，共12种。购自中国药品生物制品检定所。
三、方法
琼脂稀释法。操作按NCCLS推荐的标准程序进行，步骤如下。
1．准备含抗生素的培养基：按各抗生素对Sp的平均抑制浓度(MIC)敏感性分类界值设计抗生素的浓度。称取抗生素进行倍比稀释，将稀释液倒入培养皿，并加入50℃马来酰肼(MH)羊血培养基，使培养基和抗生素溶液充分混合，厚度达3～4 cm，在室温下凝固并且表面干燥后可以使用。
2．准备接种物：取新鲜Sp加到MH肉汤中，调菌液浓度与0.5麦氏标准浊度相等，用MH肉汤按1:10的比例稀释，培养基上每个接种点约有Sp 104 CFU。稀释好的悬液应在15分钟之内接种。
3．接种：取菌液100 μl加至接种器相应的孔中，在培养皿上做标记以定位接种物。用接种器将菌液加至培养基表面。首先接种生长对照培养基(没加任何抗生素)，每一种抗生素培养基从低浓度开始接种，依次接种完。最后再接种一个生长对照培养基。
4．孵育：在35℃含5%CO2的孵箱中培养16～20小时。
5．结果判断：细菌生长完全被抑制时的抗生素的最小浓度为MIC，忽略由接种物造成的单个菌落和轻微的模糊。
四、统计学处理
采用卡方检验，P<0.05时具有显著性差异。实验数据用SYSTAT统计软件处理。
结 果
一、80年代中期和90年代中期Sp耐药率变化
本研究将抗生素耐药定义为敏感性降低（包括中度耐药和高度耐药）［1］。不同年代Sp对各抗生素的耐药情况见表1。
表1 Sp对抗生素耐药情况在80年代和90年代中期的表现
抗生素 80年代中期菌株数(百分比，%) 90年代中期菌株数(百分比，%) P值
S I R S I R
青霉素 46
3(6)
0
26
4(12)
3(9)
0.041
头孢呋新 49 0 0 28 2(6) 3(9) 0.005
头孢噻肟 49 0 0 30 2(6) 1(3) 0.032
亚胺培南 49 0 0 29 2(6) 2(6) 0.012
红霉素 48 1(2) 0 7 2(6) 24(73) 0.000
克拉霉素 48 1(2) 0 8 0 25(76) 0.000
氯林可霉素 47 2(4) 0 10 1(3) 22(67) 0.000
四环素 2 0 47(96) 2 0 31(94) 0.683
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