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婴儿猝死综合征血中抗Ro和抗La自身抗体的检查 |
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portant factor for sudden death in some SIDS cases by causing occult damages in the fetal cardiac conduction system.
【Key words】 Sudden infant death Heart block Autoantigens Ribonucleoproteins
婴儿猝死综合征(sudden infant death syndrome, SIDS)是在无明显诱因的情况下健康婴儿突然死亡的疾病［1］。该病的病因不清，有多种假说，如窒息、神经发育不成熟、感染和心脏病变等。自60年代末尸检发现SIDS的心脏房室结处有炎症、出血、纤维化和钙化等病理改变以来［2，3］，先天性心脏传导阻滞 (CHB) 作为SIDS的一个病因，一直是重要的研究课题。绝大多数CHB的新生儿及其母亲血中有抗Ro(亦称为SSA)和抗La(亦称为SSB)自身抗体，是诊断CHB的重要实验室检查指标，但患儿母亲可无自身免疫性结缔组织病的表现［4］。这些自身抗体可能与胎儿的心脏等组织结合，导致CHB。SIDS中是否有抗Ro或(和)La自身抗体存在，尚未见报告。作者对SIDS血中的抗Ro和抗La自身抗体进行了检查，从血清标志角度研究CHB是否为SIDS的可能病因。
资料及方法
一、血清标本
240例SIDS血清取自1983～1991年间南澳大利亚州的SIDS病例，平均年龄14周，男与女之比为1.5∶1。100例成人及32例婴儿正常对照血清分别取自澳大利亚阿德雷得市红十字血站和儿童医院。系统性红斑狼疮(SLE)和干燥综合征患者血清作为阳性对照。血清贮于-70℃待检。
二、Ro和La重组蛋白的制备
Ro52和Ro60重组蛋白以pQE载体表达，产物的末端附有6个组氨酸，可通过镍(Ni)亲和层析提纯［5］。La重组蛋白表达于pQEX质粒中，产物的末端附有谷胱苷肽-S-转移酶，可通过谷光苷肽亲和层析提纯。提纯的重组蛋白经测定浓度后，贮于-70℃备用。
三、检测方法
1.免疫荧光及免疫电泳法检测抗Ro和抗La自身抗体，均为常规方法。
2.ELISA法检测抗Ro和抗La抗体：Ro52、Ro62和La抗原的包板浓度分别为1.6、2.0和1.0 mg/L。患儿及对照血清以PBS稀释500倍，以碱性磷酸酶标记的山羊抗人IgG(1∶1 000倍稀释)为二抗孵育，对硝基苯磷酸钠(PNP)显色。成人和婴儿正常血清与Ro52、Ro60和La反应的平均光密度加三倍标准差作为阴性的上限，高于此值者为阳性。
3.免疫印迹法：Ro和La重组蛋白进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，每个电泳带内加入1.0 μg重组蛋白，电泳后将蛋白转移至硝酸纤维膜，患儿血清1∶1 000倍稀释孵育，二抗为过氧化酶标记的羊抗人Ig（1∶1 000倍稀释），用增强化学发光法显示结果。
4.免疫沉降法：待检血清与蛋白A-琼脂糖孵育，再与35硫标记的Jurket细胞溶解物反应，离心沉降后进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳，凝胶干燥，在-70℃下放射自显影。
5.统计学处理：采用χ2检测。
结 果
一、免疫荧光及免疫电泳法
免疫荧光检查可见一些血清在低度稀释(1∶20)下显示弱阳性反应；免疫电泳法未见阳性反应。
二、ELISA法
100例正常成人血清中，3例抗Ro52抗体、2例抗Ro60抗体呈阳性反应，但无抗La抗体。32例正常婴儿对照血清均呈阴性反应。2例阳性对照血清对3个抗原均呈强阳性反应。240例SIDS中有39例抗Ro52抗体阳性，19例抗Ro60抗体阳性，这其中有2例抗La抗体阳性。但这些血中自身抗体滴度较低，吸光度A值（曾称光密度OD值）最高约为0.7。抗Ro52和抗Ro60血清阳性率明显高于正常对照（表1）。抗Ro60抗体阳性的SIDS病例年龄中位数为13周(8～39周)，其中70%发生于8～18周之间。
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