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细胞生长肽对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用 |
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说：一是基因学说;二是营养理论学说，营养因子在神经系统的生理和病理中起重要作用。本研究利用新生Wistar大鼠制备HIBD模型，观察碱性成纤维细胞生长肽(bFGF)对HIBD的治疗及缺氧缺血（HI）后脑细胞凋亡的影响。
材料和方法
一、材料
新生7日龄Wistar大鼠，性别不限，体重12～16 g，共105只，由本院动物实验室提供；RSS-51W型便携式数字测氧仪（上海产）；自制常压缺氧舱，40 cm×50 cm×60 cm，有2个2 cm×2 cm小孔与外界相通，内有电热毯控制舱温，钠石灰吸收舱内水分和CO2；程序性细胞死亡检测试剂盒（华美生物工程公司产品）内含末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)、生物素标记的dUTP及亲和素——辣根过氧化物酶等；bFGF（广州暨南大学生物工程研究所，批号960602）。
二、方法
1.新生大鼠HIBD模型制备：结扎大鼠左侧颈总动脉，恢复2～4小时后置于由氮气和空气调节、测氧仪监控的常压缺氧舱内［舱温（36±1)℃，氧浓度8%］，2小时后取出。
2.治疗观察：105只大鼠随机分治疗组（bFGF组）58只、未治疗组42只及正常鼠5只做对照组。58只HIBD模型鼠HI后立即给bFGF腹腔注射，4 000 U/kg，每天1次，共7天；42只鼠HI后立即腹腔注射等量生理盐水做对照。以上鼠均于观察第8天处死。观察指标：体重增长情况、死亡率、左右脑重量比较、大体及镜下病变情况及原位缺口末端标记（TUNEL）染色阳性细胞数。
3.光镜检查：经10%中性福尔马林缓冲液固定后，以视交叉、乳头体中部、大脑后缘与小脑连接处为切点，将脑冠状切成4片，常规石蜡包埋，切片（厚6 μm）分别进行HE染色和 TUNEL染色，按Gavrieli法［1］，AEC染色，苏木素复染。实验中以右侧脑做自身对照，不加TdT或生物素标记的dUTP做阴性对照，阳性细胞核和胞浆染成红色。结果判定：选取病变常见部位——脑皮质和纹状体，400倍光镜下，计数5个视野下500个细胞中的阳性细胞数。
结 果
一、bFGF治疗后一般情况比较
治疗组病死率及脑病变率明显低于未治疗组（表1）。
表1 两组大鼠病死率及脑病变率比较
组别 鼠数
(只) 死亡 脑病变检查数
(只) 脑病变数(只) 脑病变率
(%)
鼠数(只) 率(%) 轻度 重度 合计
未治疗组 42 16
38
42 10
16
26
62
bFGF组 58 2 4 40 6 4 10 25
两组比较χ2值 8.60
9.88
P值 ＜0.01 ＜0.01
注：左脑病变≤1/2为轻度，＞1/2为重度
bFGF组与未治疗组健侧（右侧）脑重量相近，但治疗组患侧（左侧）脑重于未治疗组（P＜0.001）；治疗组左右脑重量差异无显著意义，而未治疗组差异有非常显著意义（P＜0.001）。表明bFGF治疗减轻了缺氧缺血后脑萎缩。而且治疗组体重增长也明显高于未治疗组（P＜0.001）（表2）。
表2 bFGF治疗组与未治疗组脑重量、体重增长及TUNEL检测结果比较
组别 鼠数 脑重量(±s，g) 体重增长
(±s，g) TUNEL检测阳性细胞数
(个/500个细胞)
左脑 右脑 左右脑差别 自身比较t值 中位数 范围
未治疗组 42 0.47±0.10
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