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体外培养24小时受精失败卵母细胞单精子显微注射再授精的观察 |
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±3.3)年，常规IVF共取卵179个(10个/例), 体外培养24 h后所有卵母细胞均未受精。
二、方法
1.控制性超排卵：采用本中心常规IVF-胚胎移植（ET）超排卵方案［2］，注射绒毛膜促性腺激素(hCG)34～36 h后经阴道B超介导取卵，取卵日显微镜下观察所有卵丘、卵母细胞复合物形态无异常。
2.精液处理：精液处理采用Percoll梯度离心，精子浓度调至约20×106个/ml，常规IVF受精在矿物油覆盖的微滴内进行，根据精子的活动度，微滴内精子浓度约为1×105个/ml～3×105个/ml, ICSI再授精采用取卵日处理的精子。
3.卵母细胞的处理：常规IVF受精后16～18 h， 予以去卵丘处理, 检查原核及第二极体以确认受精与否，179个卵母细胞均未受精, 未受精卵予以清洗以去除附着于透明带的精子， 选择核网期（MⅡ期）成熟卵母细胞进行ICSI再授精。
4. ICSI显微操作：采用英国RI公司的显微操作系统，配以倒置显微镜，在放大200倍下进行显微操作，操作的要点是精子的制动和确保精子进入卵母细胞胞浆。携带精子的显微注射针进入细胞浆后，回吸部分胞浆表明卵膜穿破，然后将精子及被回吸的部分胞浆一起注入卵母细胞胞浆中［3］。有18个周期共130个胞浆松散的未受精MⅡ期成熟卵母细胞(有第一极体)进行ICSI再授精。
5.胚胎移植：显微注射后20～24 h后检查受精情况。正常受精的标准为见到两个独立的或有碎片的极体的同时，有两个清晰的原核。继续培养24～28 h，选择无核碎片<50%的胚胎进行宫腔内移植，无核碎片<20%的剩余胚胎予以冷冻保存。部分受精卵此时处于原核阶段，如总胚胎数<4个，原核阶段的胚胎也予以宫腔内移植。临床妊娠检查：胚胎移植后2周行尿妊娠试验检查；移植后5周行B超检查，有胎心音为临床妊娠。
结果
注射后存活卵母细胞为105个（80.8%），另外25个卵母细胞在注射过程中受到损伤死亡。100个卵母细胞正常受精，受精率为76.9%。其余存活卵母细胞不受精或发生多精受精。79个（79.0%）正常受精的胚胎发生卵裂，平均每个周期移植胚胎数为3.3个，冷冻保存胚胎数6.0个，临床妊娠2例。
妊娠的2例均为原发不育(输卵管阻塞)，男方精液常规检查均正常。1例(年龄29岁，男方年龄36岁，不育2年)共取卵7个，取卵后24 h常规IVF未受精，6个成熟卵母细胞行ICSI再授精，并发生正常受精及卵裂，因不符合冷冻胚胎的要求，故6个胚胎均于取卵周期移植，2周后尿妊娠试验阳性，5周后B超检查示胎心搏动。另1例(年龄30岁，男方年龄35岁，不育6年)共取卵22个，取卵后24 h常规IVF未受精，MⅡ期卵母细胞16个，ICSI再授精后13个卵母细胞正常受精，10个卵裂，取卵周期移植胚胎4个，冷冻保存胚胎6个，取卵周期妊娠失败后移植冷冻胚胎，B超检查示有胎心搏动。
讨论
一、 ICSI再授精是常规IVF未受精的补救方法
非男性因素不育患者常规IVF失败的原因有：（1）取卵日大部分卵母细胞不成熟, 经体外培养后释放第一极体, 但随体外培养时间的延长卵膜和透明带变韧, 导致常规IVF失败。 ICSI技术能较好的解决这部分卵母细胞的受精。（2）精卵结合障碍。其原因之一是精子与卵母细胞透明带结合后不能发生顶体反应［4］；也有学者认为是体外培养环境使透明带表面结构发生改变，因而影响精子与透明带的结合能力，ICSI技术直接将精子注射到卵母细胞浆内，使这部分卵母细胞受精。（3）卵母细胞与精子的发育不同步。这与卵母细胞不完全成熟有关，从而使精原核的形成落后于卵原核，卵母细胞胞质的不完全成熟也影响了受精卵的进一步卵裂。ICSI技术不能提高这部分卵细胞的受精率。
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