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热应激反应对大鼠感染性脑水肿保护作用的研究 |
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黄榕 杨于嘉 虞佩兰 陶永光
急性感染性脑水肿占儿内科临床各种致脑水肿原发病的70%～90%。小儿脑水肿的病死率在20%左右。如何调动机体的内源性抗损伤机制，提高细胞对致病因子的抵抗能力来防治疾病,已成为当前疾病防治研究的新领域。热应激反应(heat stress response, HSR)是机体的内源性抗损伤机制之一。高热、细菌毒素、缺氧、缺血、组织损伤等亚致死量的刺激可诱导机体细胞产生热应激反应。已证明热应激反应对大鼠的缺血性脑损伤［1］、心脏缺血-再灌流损伤、油酸肺损伤及败血症所致的肺和肝组织的损伤均有保护作用，本文将对热应激反应对大鼠的感染性脑水肿的保护作用进行探讨。
材料：1．成年健康雄性S D大鼠，体重209±30 g, 由本院动物室提供,符合二级实验动物标准。
2．主要试剂及仪器：百日咳菌液(PB)含菌量980亿/ml，由北京生物制品研究所提供；精制大肠杆菌内毒素(O127∶B8)购自Sigma公司；伊文思蓝购自Baker.化学公司；电子天平(精度1/10万)由德国Gottingen生产；电热恒温干燥箱：PH030型，上海实验仪器厂；原子吸收光谱仪：AA-6809，日本；透射电镜: HITACH,H-600,日本。
方法：1．分组及预处理：SD大鼠68只，设正常对照组8只，余60只随机分为4组，部分动物在未到处死时间前死亡。（1）正常对照组：不作预处理，置室温24小时后向左颈内动脉注入生理盐水；（2）感染性脑水肿组（10只）：不作预处理，置室温24小时后向左颈内动脉注入百日咳菌液；（3）生理盐水预处理组（10只）：腹腔注射灭菌生理盐水0.25 ml/kg，置室温24小时后向左颈内动脉注入百日咳菌液；（4）热休克预处理组（11只）：使大鼠肛温升至42℃,维持15分钟，置室温恢复24小时后，向左颈内动脉注入百日咳菌液；（5）内毒素预处理组（13只）：腹腔注射精制大肠杆菌内毒素500 μg/kg(0.25 ml/kg)。置室温24小时后向左颈内动脉注入百日咳菌液。
2．感染性脑水肿动物模型的制备：大鼠用25%乌拉坦麻醉后，分离左侧颈总动脉分别结扎其颅外分支，向左颈内动脉注入百日咳菌液0.2 ml/kg(菌液使用前充分超声震荡粉碎凝块)。正常对照组则注射灭菌生理盐水0.2 ml/kg。注菌或生理盐水后半小时内从阴茎背静脉注入2%伊文思蓝2 ml/kg。注菌或注生理盐水后观察4小时断头处死。
3．检测指标：（1）脑含水量测定：采用干湿法进行,按Elliott公式计算；（2）脑组织伊文思蓝含量测定：采用甲酰胺定量法进行；（3）脑组织钠钾测定：用原子吸收光谱法测定干脑组织中钠、钾离子含量；（4）电镜标本制备与观察：实验动物经腹主动脉注入多聚甲醛-戊二醛固定液进行前固定, 从左侧海马CA1区及大脑皮层分别切取约1 mm×1 mm×0.5 mm大小的组织块，放入同样固定液中固定2小时，经电镜制样，切片定位后,透视电镜观察及摄相。
4．统计学处理:数据均采用SPSS软件计算，计量资料用表示，组间比较用F检验，相关分析采用直线回归。
表1 注菌或盐水侧脑组织含水量、伊文思蓝含量及离子测定()
分组 含水量
(%) 伊文思蓝含量
(μg/g) 钠离子含量
(mmol/kg) 钾离子含量
(mmol/kg)
正常对照组 78.89±0.16
1.50±0.17
192.9±2.9
459.5±3.0
感染性脑水肿组 81.20±0.28 3.68±0.36 279.6±9.1 360.9±9.2
生理盐水预处理组 80.82±0.42 3.68±0.30 272.9±8.8 361.4±10.0
热休克预处理组 79.55±0.23 2.38±0.28 200.7±5.5 393.7±19.8
内毒素预处理组 79.38±0.17 2.70±0.16 210.1±11.7 404.7±11.3
F值 12.84
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