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子宫平滑肌和胎膜组织表皮生长因子受体mRNA表达水平与分娩发动的关系 |
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ong；Uterus; Placenta; Labor onset▲
现代分娩学提出的分娩发动的几种理论［1］，如子宫下段成熟理论、内分泌控制理论、机械性理论等，都认为各种分娩动因最终将引起前列腺素释放，诱导产生强有力的宫缩。近年来，有许多研究表明，表皮生长因子(EGF)可通过调节前列腺素类物质的产生而引起分娩发动。EGF是一种自分泌或旁分泌的、并对多种细胞生长、分化以及功能起调节作用的因子［2］，它必须与靶细胞表面的表皮生长因子受体（EGFR）结合才能发挥作用。本研究应用半定量逆转录聚合酶链反应技术（RT-PCR），检测正常足月妊娠妇女的子宫平滑肌标本和胎膜标本中EGFR mRNA表达水平，以探讨EGFR基因表达与分娩发动的关系。
资料与方法
一、研究对象
收集1998年9月～12月期间，在我院妇产科及湖南省妇幼保健院行剖宫产手术分娩的产妇20例，根据临产状态分为未临产组和已临产组，每组10例。其分组标准如下：（1）未临产组：胎儿监护仪显示无宫缩，肛查宫口未开。（2）临产组：自然临产，胎儿监护仪显示有规律宫缩，肛查或阴道检查宫口扩张≥4 cm。两组产妇均无妊娠高血压综合征(妊高征)、多胎妊娠以及内外科合并症。术前肝、肾功能检查正常。两组产妇手术均采用连续硬膜外麻醉，术前均未使用平滑肌松弛素或前列腺素类衍生物。两组产妇年龄、产次、孕龄及新生儿出生体重比较，差异均无显著性(P>0.05)。
二、方法
（一）组织取材
每例产妇取新鲜的子宫平滑肌和胎膜两份标本。即在剖宫产时，胎盘娩出前，宫体及全身未用宫缩剂时，无菌切取子宫下段，横切口上缘中段一小条平滑肌组织约0.5～1．0 g。胎盘娩出时，在未用宫缩剂的情况下，无菌剪取约2 cm×2 cm×3 cm的胎膜组织。两份标本分别立即放入液氮内速冻，待转移至实验室后，贮存在-70℃超低温冰箱待测。
（二）半定量RT-PCR检测子宫平滑肌和胎膜组织中EGFR mRNA水平
1．引物：EGFR引物［3］为P1 5′-AGC TCA CGC AGT TGG GCA CT-3′， P2 5′-TCT CAT GGG CAG CTC CTT CA-3′，该对引物扩增片段长度为305bp。三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）作为内参照，引物参考GAPDH基因完整序列设计［4］，其引物P1′ 5′-GCT GGC GCT GAG TAC GTC GT-3′，P2′ 5′-TGG GTG TCG CTG TTG AAG TC-3′。该对引物扩增片段长度为605bp。
2．RT-PCR操作步骤：（1）采用Trizol试剂提取标本组织中总RNA。（2）用核酸蛋白检测仪（Beck- man）检测总RNA水平。（3）检测RNA完整性。（4）采用二步法RT-PCR［3］。经过充分预实验，以确定模板量和反应周期，保证聚合酶链反应（PCR）产物定量分析是在指数增长期。①逆转录以RNA为模板，反转录合成cDNA。②PCR以cDNA为模板行体外扩增。（5）RT-PCR扩增产物以1.5%琼脂糖凝胶、100V电压电泳，40～60 min在紫外线透射仪上观察，并与PCR标准相对分子质量比较，305 bp为EGFR扩增片段，605 bp为内参照GAPDH扩增片段。（6）凝胶摄相后用图像处理系统计算其吸光度（A）×面积值，与内参照相比较计算其比值。
3.组织总RNA行PCR检测：组织总RNA不经逆转录直接行PCR检测，EGFR或GAPDH均无扩增产物出现。
三、统计学方法
采用t检验、t′检验。
结果
一、EGFR mRNA在两种组织中的表达
两组子宫平滑肌标本及胎膜组织标本中均有EGFR mRNA表达（图1）。
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