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子宫内膜层粘连蛋白与Norplant致子宫异常出血的相关性研究 |
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取同期在门诊手术室放置宫内节育器的健康育龄妇女,年龄23～36岁，月经规律,连续3个月未用过甾体激素类药物。36例埋植Norplant 者中,埋植半年12例，其中月经规律及有不规则出血者各6例；埋植1年12例，其中月经规律及有不规则出血者各6例；埋植2年12例，其中月经规律及有不规则出血者各6例。
二、方法
1.取材:在月经周期的增殖期(即月经周期第10～14天)采取子宫内膜。对照组以常规组织学染色确认, Norplant组根据主诉确定。
2.染色：刮取的子宫内膜组织经10%甲醛固定，石蜡包埋，切片厚4 μm,分别进行苏木精伊红常规组织学染色和LN免疫组织化学（免疫组化）反应。 免疫组化使用链酶亲和素-生物素(labelled streptavidin biotin，LSAB)法, 兔抗人LN(一抗,工作液)及通用型过氧化物酶免疫组化药盒为美国ZYMED公司产品（ 购自中山生物技术有限公司）。全部标本在同一时间、同一条件下进行染色。免疫组化反应步骤： (1)切片脱蜡,经下行乙醇放入磷酸盐缓冲液;(2)3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶（室温5 min）;(3)正常羊血清抑制非特异性反应（室温5 min）;(4)一抗室温反应30 min;(5)生物素标记的二抗（抗兔免疫球蛋白）作用（室温10 min）;(6)辣根过氧化物酶标记链霉卵白素室温下反应10 min;(7)二胺基联苯胺显色反应10 min;(8)常规脱水，二甲苯透明，树胶封片。以正常子宫内膜切片为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。
3.结果判定: 免疫组化阳性反应物为黄色。用显微分光光度计（型号：Leitz，MPV-COMBI，德国莱卡公司产品）进行定量测定。每1例标本测定10个区域， 测定透光度值，经计算机处理得到相应的吸光度值，数值越大，说明免疫组化反应越强。
三、统计学方法
采用t检验及方差分析，结果以±s表示。
结果
一、埋植Norplant后子宫内膜的组织学变化
与对照组比较，Norplant组妇女的子宫内膜表面上皮发育不良,局部有脱落。埋植Norplant后月经规律者的子宫内膜组织中无明显出血，而有不规则出血者中的12例子宫内膜组织浅层（即表面上皮下方）和内膜中层有局部性出血，出血部位的血管多呈断裂状;部分标本的内膜间质呈致密状，其中部分组织伴有纤维增生，也有间质疏松，但共同特点是子宫内膜腺体明显减少，有不同步现象,即同一子宫内膜组织中的腺体可分别表现为增殖期或分泌期改变。
二、 埋植Norplant后子宫内膜LN含量的变化
LN主要分布在子宫内膜的表面上皮基膜、腺上皮基膜和血管内皮的基膜处。埋植Norplant后，（1)基膜变薄,有不规则出血者血管基膜有部分断裂现象，特别是埋植半年者变化更明显；(2)有不规则出血者腺上皮基膜和血管基膜的LN含量均低于月经规律者,尤以埋植半年和1年时明显(P<0.05); 表面上皮基膜埋植半年时不规则出血者低于月经规律者(P<0.05)。见表1。
表1 子宫内膜LN免疫组化反应
吸光度值比较（×10-3，±s)
组别 总例
数 表皮上
皮基膜 血管内
皮基膜 腺上皮
基膜
对照组 6
80.4±0.4
103.2±0.3
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