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雌激素对卵巢癌细胞株体外生长的影响 |
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e of Stage G2/M increased from 14.0% to 17.0%～28.0%; In OVCAR3, cell rate of Stage G2/M decreased from 37% to 22.0%～30.0%, cell rate of Stage S increased from 31.0% to 38.0%～51.0%, cell rate of Stage G0/G1 did not changed much (cell rate without estradiol was 32.0%, while cell rate with estradiol 29.0%～31.0%). Estrogen receptors of the two cell lines were positive and not changed after cultured in the medium with 17-β estradiol. Conclusion The proliferate capacity of the two epithelial ovarian cancer cell lines CAOV3 and OVCAR3 can be inhibited by the estrogen (0.25～5.00 nmol/L), possibly through the change of the tumor cell kinetics.
【Key words】 Ovarian neoplasms;Estrogen replacement therapy； Estradiol
近年来，卵巢癌患者术后使用雌激素替代治疗受到临床的重视，但其安全性问题一直未能得到解决。许多学者对此进行了多方面的研究，但至今未得出一致的结论［1-8］。本研究采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、流式细胞术、免疫组织化学和放射免疫分析等方法，分析了卵巢癌细胞株CAOV3和OVCAR3于体外加入不同浓度的17-β雌二醇（E2）培养液前后，细胞活性、周期、受体等指标变化,以探讨雌激素对卵巢癌细胞体外生长和周期的影响，为临床卵巢癌患者进行雌激素替代治疗提供理论依据。
材料和方法
一、 卵巢癌细胞株的培养与17-β E2的配制
CAOV3和 OVCAR3细胞，由美国Sloan Katherine 癌瘤研究所提供，以Gibco公司研制的无菌粉剂L-15加水配成10g/L，并分别加入胰岛素(终浓度为24 U/L)、 氢化可的松(终浓度为100μg/L)和庆大霉素(终浓度为100U/ml)；同样配制 RPMI-1604 (浓度为10g/L)，并分别加入青霉素(终浓度为100IU/ml)、 链霉素(终浓度为 100 μg/ml)；常规方法复苏冻存CAOV3和OVCAR3细胞，接种于含15%的热灭活的小牛血清培养液的瓶中，置于37℃含 5%二氧化碳饱和湿度培养箱内，用0.25%的胰酶消化传代。将溶于乙醇的17-β E2用氮气吹挥浓缩后，加入含15%小牛血清的L-15 (或RPMI-1640) 培养液中，制成10nmol/L工作液。使用时,将工作液用培养液分别稀释为5.00、1.00、0.50和0.25 nmol/L即可(稀释后培养液中的乙醇浓度<0.8%)。
二、17-β E2与卵巢癌细胞株培养
1.卵巢癌细胞株生长抑制率：取生长良好的CAOV3和OVCAR3细胞（细胞浓度为1×105个）铺40孔板，过夜贴壁。然后分别加入纯培养液及0.25、0.50、1.00和5.00 nmol/L的17-β E2培养液作为对照组和实验组，每组4孔，3d后换液，6d时用MTT比色法检测不同板孔的吸光度(A)值，计算不同浓度17-β E2对细胞生长的抑制率［抑制率=(对照组A均值-实验组A均值)/对照组A均值］。
2.卵巢癌细胞株生长周期：取生长良好的细胞株CAOV3和OVCAR3（细胞浓度为1×105个）铺6孔板，过夜贴壁。然后分别加入纯培养液和0.50、5.00 nmol/L 17-βE2培养液作为对照组和实验组，每组2孔，3d后换液，第6天时检测每组板孔内细胞的生长周期。测量时将贴壁细胞用0.25%胰酶消化1 min，以1 500r/ min 离心10 min,将细胞沉淀用磷酸缓冲液（PBS）冲洗后, 70%的冷乙醇固定3～5h。之后，再以1 500r/ min 离心10 min。上一页 [1] [2] [3] 下一页
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