iddot;d-1)，共4周。 1.2.2 心肌肥大动物模型的鉴定 实验结束，动物称质量后，迅速打开胸腔，取出心脏，放入冰生理盐水中，去除杂质及脂肪，分离左心室，分析天平称质量，计算心肌肥大指数。心肌肥大指数=左心室质量(LVW)/体质量(BW)[5]。
1.2.3 心肌细胞培养与鉴定 取新生Wistar乳鼠心室肌，用胰蛋白酶消化法消化成单细胞悬液，经差速贴壁分离后，将未贴壁心肌细胞用含体积分数0.15胎牛血清及青链霉素的DMEM培养液稀释，并加入0.1 mol/L BRDU以抑制非心肌细胞的增殖，然后将细胞均匀地接种于25 mL培养瓶中，置于37 ℃,含体积分数0.05 CO2培养箱中培养2 d，弃原液，用无血清DMEM液洗2次，用含体积分数0.15胎牛血清的DMEM培养2 d。分为4组，各10例。①对照2组：加入培养液5 mL;②AngⅡ2组：加入AngⅡ 0.5 μg，培养液5 mL，AngⅡ终浓度为1×10-7 mol/L; ③AngⅡ加川穹嗪2组：分别加入AngⅡ 0.5 μg，川穹嗪64 μg，培养液5 mL，AngⅡ终浓度为1×10-7 mol/L，川穹嗪终浓度为1×10-4 mol/L。每24 h加药1次，每48 h换液1次，于加药后第7天收集心肌细胞，提取总RNA。
1.2.4 RTPCR检测心肌细胞ANP mRNA表达水平 用预冷的无菌PBS清洗待测细胞2次;吸干残液后，按1 mL/cm2加Trizol液裂解细胞;将细胞裂解液移至2 mL离心管中，室温下静置5 min;细胞裂解液中提取细胞总RNA;RNA沉淀干燥后，用20 μL DEPC溶解。 取1 μL RNA溶液，稀释，经紫外线分光光度仪检测其波长260 nm及280 nm处吸光度，估算其RNA浓度[6]。逆转录合成cDNA， PCR扩增后，取10 μL PCR反应产物在15 g/L的琼脂糖凝胶上电泳，透射紫外线灯下观察，拍照，用凝胶成像系统进行扩增产物定量分析,用待测基因ANP/GAPDH值表示待测基因ANP相对水平。
1.2.5 Western blot方法检测川穹嗪对AngⅡ致培养心肌细胞pJAK蛋白15 min、 pSTAT蛋白5 min [7]的影响 按文献[8]的方法制作蛋白标准曲线，测出待测蛋白样本的吸光度(A)值。抽提细胞总蛋白：细胞长至瓶底的80%～90%时，弃去培养液，用预冷的PBS洗涤2次，沥干;向培养瓶中加入相应体积的蛋白裂解液，冰浴5～20 min;使用刮棒刮下细胞，收集到预冷的1.5 mL离心管中，4 ℃下以12 000 r/min离心20 min，取上清分装，保存于-70 ℃;根据标准曲线测量蛋白浓度。Western blot检测：取等量pJAK、pSTAT蛋白(100 μg)与上样缓冲液混合，变性后上样，电泳，转膜，封闭，洗涤，用封闭液将JAK/STAT的一抗(兔抗)浓度调整至1∶1 000，4 ℃与膜孵育过夜;洗涤;二抗用封闭液按1∶5 000稀释，室温孵育1 h;洗涤;加底物显色剂，暗室中进行显色。增强化学发光法检测显色蛋
白质含量。 1.3 统计学方法
应用PPMS 1.5[2]统计学软件进行数据处理，结果以±s表示,数据间比较采用方差分析，以P<0.05差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组心肌肥大指数比较
对照组心肌肥大指数为1.18±0.11，AngⅡ组为1.41±0.14，AngⅡ加PBS组为1.42±0.13，AngⅡ+川穹嗪组为1.26±0.09。AngⅡ组与对照组比较，心肌肥大指数明显增高，差异有统计学意义(F=32.675,q=6.25，P<0.01);AngⅡ+川穹嗪组与AngⅡ组比较，心肌肥大指数明显下降，差异有显著性(q=5.19，P<0.05)。
2.2 各组ANP mRNA表达水平比较
对照2组ANP mRNA为0.142±0.102，AngⅡ2组ANP mRNA为0.554±0.101，AngⅡ+川穹嗪2组ANP mRNA为0.303 ±0.102。AngⅡ2组与对照2组比较，ANP mRNA表达增加，差异有显著意义(F=45.674,q=11.23，P<0.01)。AngⅡ+川穹嗪2组与AngⅡ2组比较，ANP mRNA表达减少，差异有显著性(q=7.53，P<0
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