遗传性角膜病小鼠生物学特性观察

    1.1   实验动物   C57BL/6J小鼠（B6）和遗传性角膜病小鼠（B6-Co）由南通大学实验动物中心提供，均符合清洁级标准。实验动物生产许可证：SCXK（苏）2002-0002，使用许可证：SYXK（苏）2002-0022。

    1.2   饲养条件   实验小鼠均饲养在屏障环境中，饲养环境指标符合国家标准要求。室内温度控制在20～25 ℃，氨浓度≤14 mg/m3，湿度控制在40%～70%之间，噪音≤60 dB。饲喂经60Co γ辐照灭菌的全价颗粒饲料（由苏州市双狮实验动物饲料科技有限公司生产），自由采食，饮用纯净水，每周换两次垫料，根据饮水情况及时更换水瓶。

    1.3   繁殖性能和生长发育的观察

    1.3.1   繁殖性能的观察   正常B6小鼠繁殖性能及生长发育情况的数据由南通大学实验动物中心饲养室提供。遗传性角膜病小鼠的繁殖采用正常B6与角膜病小鼠交配的方式。共配50对，其中11对为B6雄性小鼠与B6-Co雌性小鼠配对，39对为B6-Co雄性小鼠与B6雌性小鼠配对。观察并记录不育率、胎间隔、窝产仔数、离乳率、仔鼠角膜病变表型数。

    离乳率=离乳数/出生数×100%

    平均窝产仔数=仔鼠总数/窝数

    1.3.2   生长发育的观察   仔鼠从出生后1周开始对其称重，每周1次至6周龄。   

    1.4   脏器重量和脏器指数的测定   在繁殖后代中随机抽取6周龄的B6-Co表型正常小鼠、B6-Co单眼（单眼病变）小鼠、B6-Co双眼（双眼病变）小鼠各24只，雌雄各半，禁食12小时。用JY4001天平（上海天平仪器厂）对小鼠进行称重，颈椎脱臼处

    脏器指数=脏器重量（mg）/ 体重（g）

    1.5   血常规和尿常规   随机抽取6周龄的B6-Co表型正常小鼠、B6-Co单眼小鼠、B6-Co双眼小鼠各25只，雌雄不拘。禁食12 h后摘眼球取血，收集到经10 μl K2EDTA抗凝剂预处理的试管内，每只采集0.5 ml，轻轻摇匀，防止血液凝固。2 h内用迈瑞BC-2800全自动血液细胞分析仪对血样进行WBC（白细胞）、Hb（血红蛋白）、RBC（红细胞）、HCT（红细胞压积）、MCV（平均红细胞体积）、MCH（平均红细胞血红蛋白含量）、PLT（血小板数目）、PCT（血小板压积）等指标的测定。

    按压法收集小鼠的尿液，用Combi Screen 11SYS试纸（科宝11SYS抗VC尿试纸条，批号025010705052）和Combi 100尿液分析仪对尿样进行胆红素、酮体、维生素C、尿蛋白、潜血、pH、白细胞、比重等指标的测定。

    1.6   行为学测试

    1.6.1   行为学实验程序[3-4]    随机抽取6周龄的B6-Co表型正常小鼠、B6-Co单眼小鼠、B6-Co双眼小鼠各10只，雌雄不拘。实验小鼠满6 w后进行为期9 d的行为学实验： 运动协调能力检测（5 d）和生活习性检测（4 d）。运动协调能力检测在8∶00～16∶00期间进行。生活习性检测从第1天17∶00～第2天8∶00。

    运动协调能力检测项目为抓绳和平衡木，生活习性检测项目为筑巢。各

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