苦参素对实验性肝纤维化的干预作用

    1   材料与方法

    1.1   实验动物   SD大鼠70只，体重140~160 g，雌雄兼用，由南通大学实验动物中心提供。动物许可证号：SCXK（苏）2002-0019。所有动物自由摄食，饮水。

    1.2   药品与试剂   （1）四氯化碳（CCl4）：宜兴市第二化学试剂厂，批号20010608，使用时用食用花生油配制成40%的油溶液；（2）苦参素：（主要成分为氧化苦参碱oxymatrine， OM）:江苏正大天晴药业股份有限公司，批号:20021004。细结晶颗粒，按需用灭菌生理盐水配制呈溶液使用；（3）丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物医学工程研究所，批号：20030307；（4）羟脯氨酸（HYP）含量测定试剂盒，南京建成生物医学工程研究所，批号：20030321。

    1.3   实验方法

    1.3.1   实验动物分组及模型制备[4]   SD大鼠50只，随机分为5组：Ⅰ正常对照组、Ⅱ模型组、Ⅲ 苦参素小剂量治疗组（40 mg/kg）、Ⅳ苦参素中剂量治疗组（80 mg/kg）、Ⅴ苦参素大剂量治疗组（160 mg/kg），每组10只动物，雌雄各半。各造模组均采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型：用40%CCl4花生油溶液3.0 ml/kg皮下注射，每周2次，共10周；动物每周称重1次，并根据体重调整CCl4的剂量，正常对照组仅以花生油等容量皮下注射。苦参素治疗组从CCl4造模后第4周开始至第10周腹腔注射给药，每日1次，给药容量均为1.0 ml/kg。正常对照组、模型组腹腔注射等容量灭菌生理盐水，每日1次。

    1.3.2   肝功能的检测   造模至第10周末，全部动物禁食16 h后，断头取血。血液40 ℃条件下2000 rpm离心15 min，吸取血清于4 ℃冷藏，24 h内用生化自动分析仪测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、胆汁酸（TBA）和γ－谷氨酰转移酶（GGT）。

    1.3.3   肝脏指数的测算   造模至第10周末，全部动物称体重。取血后，将动物解剖，取出肝脏，滤纸拭干，置于电子天平上称重，以肝脏指数＝肝脏重量/体重×100，计算肝脏指数。同时剪取肝脏组织-20 ℃保存，备制作肝匀浆液之用。

    1.3.4   肝组织中HYP和MDA含量的检测   取10％肝组织匀浆液测定每份肝匀浆中HYP和MDA与特定试剂反应后溶液的吸光值，并根据肝组织匀浆液中总蛋白的含量，分别计算肝脏中HYP和MDA的含量。

    1.3.5   统计学方法   使用Stata6.0统计软件包进行数据处理。数据以■±s表示，用单因素方差分析和F检验处理数据，以P<0.05为差异有统计学意义。

    2   结 果

    2.1   动物一般情况   实验过程中，正常对照组动物一般情况良好；模型组动物毛色暗淡，活动减少；食量下降，尿色发黄，部分动物出现慢性腹泻症状；各治疗组动物一般情况在给药后逐渐改善。实验结束时可见正常对照组大鼠肝脏大小正常，色泽暗红，质地光滑柔软，细腻；模型组大鼠肝脏大多明显肿大，颜色灰白，肝质地变硬，边缘变钝，表面呈粗糙桔皮状，可见明显的、均匀分布的小结节，个别动物部分肝叶与腹腔其它脏器有黏连，且有腹水出现，腹水颜色尚清。余各治疗组动物肝脏体积稍大，颜色稍显

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