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异位子宫内膜细胞的凋亡与增殖的研究 |
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was significantly decreased in the ectopic endometrial cells ［(2.74±1.54)％］ as compared to eutopic endometrial cells ［(9.97±1.26)%］ (P<0.05). bcl-2 expression in endometriotic cells was significantly increased compared with the eutopic endometrial cells (P<0.05). The expression of EGFR mRNA in E2, P group was 1.10±0.19 and 1.28±0.24 respectively, which were significatly higher than that of control(0.90±0.10, P<0.01). In P+ mifepristone group it was 0.63±0.11, significantly lower than that of control(P<0.001). Conclusion The resistance of endometriotic cells to apoptosis may be fundamental in the aetiology and (or) pathophysiology of endometriosis. Estradiol and progesterone promote hyperplasia and differentiation of endometriotic cells while mifepristone inhibits.
【Key words】 Endometriosis Apoptosis Genes, bcl-2 Receptors, epidermal growth factor-urogastrone
近年来,人们已逐渐认识细胞凋亡对维持细胞平衡生长的重要作用［1］，子宫内膜异位症（内异症）异位内膜细胞的生长特性可能与细胞凋亡的改变有关。许多研究表明，表皮生长因子是卵巢甾体激素作用于其靶组织的重要介质［2］。为探讨细胞凋亡与内异症的关系，我们对离体培养的异位内膜细胞的细胞凋亡指数及其抗凋亡基因bcl-2的表达水平进行了检测。同时通过测定雌二醇(E2)、孕酮(P)及P受体拮抗剂米非司酮对体外培养的异位内膜细胞表皮生长因子受体（EGFR）基因表达的影响，了解异位内膜组织生长调节的机理。
资料与方法
一、研究对象
选自1997年4月至11月在同济医科大学附属同济医院行手术治疗的内异症患者15例，平均年龄29岁（26～34岁），术前3个月内无激素用药史。手术均在增殖期及分泌早期进行，术中取典型的异位病灶组织（盆腔腹膜、腹壁及卵巢异位灶）（异位内膜组），立即置入冰冷、无菌、含青霉素及链霉素的平衡溶液（Hank溶液）中送入实验室。所取组织均经病理学诊断证实。同时取11例同时期非内异症患者的在位子宫内膜组织（在位内膜组），处理方法相同。
二、方法
1．组织处理及细胞培养：异位及在位内膜细胞的培养方法参照Ryan等［3］报道的方法，将组织尽量剪碎（直径小于1 mm×1 mm），加入0.1％胶原酶溶液混匀后于37℃、5%二氧化碳培养箱中放置120～150分钟。将消化后的细胞悬液（含有内膜腺细胞及间质细胞）种植在25 ml的培养瓶或含有细胞小玻片的小瓶中，加入培养液置入37℃、5%二氧化碳培养箱中培养，在MEM培养基(美国Gibco公司产品)中加入10％小牛血清、2%谷氨酰胺、20 mmol缓冲液、100 U/ml青霉素、100 mg/ml链霉素。24小时后倒去未贴壁细胞继续培养，间隔2～3天换液。对原代细胞于光镜下(×200倍)观察形态及生长情况。
2．细胞凋亡指数检测：采用流式细胞术检测。细胞培养5～7天（细胞全部或大部分融合），用0.25％胰酶消化、Hank溶液洗涤后，加入预冷的70％乙醇固定，调整样品中细胞数为1×105个/ml，存放于4℃冰箱待检(时间不超过1个月)。检测时将备检的细胞悬液离心、洗涤后，加入碘化丙锭染色液(20 ng/ml)，同时加入RNA酶(50 U/ml)，于室温不透光处孵育30分钟后，检测每份样本上一页 [1] [2] [3] 下一页
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