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孕鼠高血糖对胎鼠胰岛功能的影响 |
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s higher and appeared earlier than that of controls. Conclusion Insulin synthesis and secretion function of β-cells of fetal pancreas from hyperglycemia rats were enhanced and the pancreas had a hypersensitive response to glucose challenge.
【Key words】 Pregnancy Hyperglycemia Rats Islets of langerhans Insulin
妊娠期糖尿病造成的胎儿宫内生活环境的改变，严重影响了胎儿胰岛的生长、发育及功能成熟。实验表明,胎儿胰岛的增生及β-细胞脱颗粒功能的改变，与孕妇高血糖的严重程度密切相关［1］。本研究采用静脉输注葡萄糖建立的孕鼠高血糖动物模型，通过对胎鼠胰岛细胞抽提实验、胰岛素释放实验及灌流实验，静态和动态观察孕鼠高血糖时，胎鼠胰腺释放及合成胰岛素功能的变化，以探讨孕鼠高血糖对胎鼠胰岛功能的影响。
材料和方法
一、动物模型制作
选取28只成年雌性SD大鼠 (上海医科大学实验动物部提供)，体重200～250g，随机分为两组。模型制作参照Nicoladis等［2］的方法，实验组自交配后第16.5天起输注30%葡萄糖液（2 ml/min，微电脑输液泵控制），至孕21.5天；对照组同期以与实验组同样速度输注无菌蒸馏水。两组动物均自由饮食，活动不受限制，生活环境相同。
二、胰岛素的合成与释放实验
1．胰岛素抽提实验：两组孕鼠均于孕21.5天，剖腹取胎鼠，分离胎鼠胰腺，称重，研磨成匀浆，置4℃酸化乙醇溶液中抽提过夜。离心取上清液，应用放射免疫法测定胰岛素含量（胰岛素试剂盒购自华西医科大学糖尿病科技开发研究所）。
2．胰岛素释放试验：同上无菌取胰腺组织，称重后剪碎，用Hanks液洗净，分别置低糖(2.8 mmol/L)Hanks液、低糖+精氨酸(10 mmol/L)Hanks液、高糖(16.7 mmol/L)Hanks液、高糖+精氨酸Hanks液，37℃培养箱中温育2小时，用酶联免疫磁分离测定法(IEMA)检测胰岛素水平。同时计算两组胎鼠的刺激指数(刺激指数=高糖刺激时胰岛素释放量/低糖时胰岛素释放量)。
3．胰岛组织灌流试验：自行设计灌流装置，主要包括一个微电脑输液泵，恒温槽，灌流小室及自动样品收集器。灌流液包括低糖Hanks液和高糖Hanks液。灌流时将称重后的胰腺组织剪碎，置入装有普通定性滤纸的微型过滤器，放入灌流小室，灌流小室保持37℃恒温水浴，并通以含5%二氧化碳的空气。由微电脑输液泵控制，先用低糖灌流液以0.5ml/min恒速灌流平衡1小时，收集最后10分钟的灌流液，然后改换为高糖灌流液，每2分钟收集1管标本，持续60分钟后再改用低糖灌流液。
三、统计学方法
将所得的数据采用两样本均数的t检验。所有参数均以±s表示。
结果
一、两组胎鼠胰岛素水平比较
测定孕鼠21.5天时两组胎鼠胰腺内胰岛素水平，不论是每个胰腺内的胰岛素水平，还是单位重量胰腺组织内的胰岛素水平，实验组都明显高于对照组，见表1。
表1 两组胎鼠胰腺及单位重量胰腺组织
胰岛素平均水平比较(±s)
组别 例数 每个胰腺内胰岛素
平均水平(ng) 单位重量胰腺组织
胰岛素水平(ng/mg)
实验组 11 3329.81±163.39** 158.56±23.34*
对照组 10 2390.04±151.39 125.79±17.97
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