L DAPI复染剂滴加于杂交区域位置,立即盖上盖玻片。暗处放置10~20 min后,在荧光显微镜下选用合适的滤光片组观察玻片。单个间期细胞核中红色及绿色信号各2个为正常细胞。单个间期细胞核中红色信号大于2个,绿色信号不少于2个为hTERC基因扩增异常细胞。计数200个细胞,异常细胞比例大于阈值,表示发生了hTERC基因扩增。
1.4.6 统计学分析 用SPSS 1310软件进行统计学χ2 检验, P <0.05为差异有统计学意义。
2 结果
随着子宫颈脱落细胞病变的进展, hTERC基因阳性表达率逐渐增高。hTERC基因表达在CINⅡ和CINⅢ组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),子宫颈癌组与CIN各组及正常对照组中hTERC基因表达比较差异有统计学意义(P<0.05),见表1。表1 5组样本hTERC 基因检测结果
3 讨论
端粒酶是由RNA和蛋白质亚基组成的核糖核蛋白复合物,以自身RNA组分为模板、蛋白质组分为具有催化活性的逆转录酶,合成端粒重复序列,维持端粒长度,绝大多数正常的体细胞和组织端粒酶均为阴性,端粒酶的激活与细胞的无限增殖有关,大量研究结果表明,端粒酶活化是许多肿瘤发生的必经之路,端粒酶的激活可能是宫颈癌发生的早期事件[3],因此端粒酶可以作为宫颈癌及癌前病变的有效标志物。
hTERC基因是人端粒酶的主要组分之一, hTERC基因的突变将导致端粒酶功能改变,从而出现染色体异常,引起肿瘤发生。宫颈癌的发生发展几乎都伴有hTERC基因的扩增。本文应用FISH技术对宫颈癌和癌前病变宫颈涂片进行了分子水平的检测。研究表明, 随着宫颈病变的进展, hTERC基因的异常表达率和基因拷贝数逐渐增加,基因异常扩增阳性率在CINⅡ以上病变组明显高于CINⅠ及以下组。并显示随病变级别增高,浸润癌组与CIN组相比, hTERC 基因拷贝数明显增加。在杂交信号类型中,hTERC基因高拷贝型率随病变级别增高比例明显增高,并且通过随访发现病变发生高级别进展组的hTERC基因拷贝数明显高于未进展组,可能与在病变发展过程中非整倍体的增加以及染色体不稳定增加有关,其中3q染色体不稳定增加可能是发生宫颈癌变的因素之一。
TERC扩增可以预测从CINⅠ、CINⅡ到CIN Ⅲ和浸润癌进展, 这与Kerstin等的研究一致。因此,TERC基因是宫颈癌重要的肿瘤标志物,检测TERC扩增可以帮助确定CIN分级及预测低分化病变演变的高风险。通过对TERC基因的检测可以在癌前病变时发现和治疗, 达到预防宫颈癌的目的[4]。另外, TERC的扩增对癌前病变的转归可能有预测价值,其确切的结论需做进一步的追踪调查和研究。
【参考文献】
[1] Parkin DM, Bray F, Ferlay J, et al. Global cancer atistics,2002[J ]. CA Cancer J Clin, 2005,55(2):74-108.
[2] Andersson S, Wallin KL, Hellstrêm AC, et al.Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas[J]. British Journal of Cancer, 2006, 95(3):331.
[3] Oikonomou P, Mademtzis I, Messinis I, et al. Quantitative determination of human telomerase reverset ranscriptase mes2 senger RNA expression in premalignant cervical lesions and correlation with human papillomavirus load [J]. Hum Pathol,2006,37(2):35-142.
[4] 彭玉池,凌斌,周颖.子宫颈病变脱落细胞中端粒酶的表达及临床意义[J].实用癌症杂志,2008,23(6):574-576.
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